Qu'est-ce que le calculateur d'activité enzymatique ?
Cet outil mesure la vitesse à laquelle une enzyme transforme son substrat, exprimée en unités internationales (U), où 1 U = 1 µmol de substrat transformée par minute. Il s'appuie sur la loi de Beer-Lambert pour convertir une variation d'absorbance mesurée en une quantité molaire de produit, puis rapporte cette vitesse au volume d'enzyme utilisé. C'est un outil universel de biochimie et d'enzymologie, qui ne dépend d'aucun pays en particulier.
Comment l'utiliser
Réalisez votre dosage spectrophotométrique et relevez la variation d'absorbance (\(\Delta A\)) sur une durée fixe. Saisissez \(\Delta A\), le temps de réaction en minutes, le coefficient d'extinction molaire \(\varepsilon\) de votre chromophore (en mM⁻¹·cm⁻¹), le trajet optique de la cuve (généralement 1 cm), le volume réactionnel total et le volume d'échantillon enzymatique ajouté. Veillez à ce que \(\varepsilon\) et vos volumes soient exprimés dans des unités cohérentes afin d'obtenir un résultat en U/mL.
La formule expliquée
$$\text{Activité (U/mL)} = \dfrac{\Delta A \times V_{total}}{\varepsilon \times l \times t \times V_{enzyme}}$$ Le terme \(\Delta A / (\varepsilon \times l)\) donne la variation de concentration (mM) du produit d'après la loi de Beer. En le multipliant par \(V_{total}\), on convertit cette concentration en µmol de produit. La division par le temps \(t\) fournit des µmol/min (les unités, U), et la division par \(V_{enzyme}\) ramène le tout à l'activité par mL d'enzyme.
Exemple concret
Supposons \(\Delta A = 0{,}3\), \(t = 1\) min, \(\varepsilon = 6{,}22\) mM⁻¹·cm⁻¹ (NADH à 340 nm), \(l = 1\) cm, \(V_{total} = 3\) mL et \(V_{enzyme} = 0{,}1\) mL. L'activité vaut alors $$\frac{0{,}3 \times 3}{6{,}22 \times 1 \times 1 \times 0{,}1} = \frac{0{,}9}{0{,}622} \approx 1{,}447 \text{ U/mL}.$$ La vitesse totale dans la cuve est de \(0{,}9 / 6{,}22 \approx 0{,}1447\) µmol/min.
FAQ
Dans quelle unité doit être exprimé \(\varepsilon\) ? Utilisez des mM⁻¹·cm⁻¹ avec des volumes en mL pour obtenir des U/mL. Le NADH à 340 nm vaut 6,22 mM⁻¹·cm⁻¹.
Qu'est-ce qu'une unité (U) ? Une unité correspond à la quantité d'enzyme qui transforme 1 µmol de substrat par minute dans les conditions du dosage.
Comment obtenir l'activité spécifique ? Divisez le résultat en U/mL par la concentration en protéines (mg/mL) de votre échantillon enzymatique pour obtenir des U/mg.
