Enzim Aktivitesi Hesaplama Aracı Nedir?
Bu araç, bir enzimin substratı ne kadar hızlı dönüştürdüğünü uluslararası birim (U) cinsinden ölçer; burada 1 U = dakikada dönüştürülen 1 µmol substrat anlamına gelir. Ölçülen absorbans değişimini Beer–Lambert yasası aracılığıyla molar ürün miktarına çevirir ve ardından bu hızı kullanılan enzim hacmine göre normalize eder. Tüm dünyada geçerli, evrensel bir biyokimya/enzimoloji aracıdır ve herhangi bir ülkeye özel değildir.
Nasıl Kullanılır?
Spektrofotometrik tayininizi gerçekleştirin ve belirli bir süre boyunca oluşan absorbans değişimini (\(\Delta A\)) kaydedin. \(\Delta A\) değerini, dakika cinsinden reaksiyon süresini, kromoforunuzun molar ekstinksiyon katsayısı \(\varepsilon\)'yi (mM⁻¹·cm⁻¹ biriminde), küvet ışık yolu uzunluğunu (genellikle 1 cm), toplam reaksiyon hacmini ve eklenen enzim örneği hacmini girin. Sonucun U/mL biriminde çıkması için \(\varepsilon\) ile hacimlerinizin birimlerinin birbiriyle tutarlı olduğundan emin olun.
Formülün Açıklaması
$$\text{Aktivite (U/mL)} = \dfrac{\Delta A \times V_{toplam}}{\varepsilon \times l \times t \times V_{enzim}}$$ Buradaki \(\Delta A / (\varepsilon \times l)\) terimi, Beer yasasına göre üründeki derişim değişimini (mM) verir. Bunu \(V_{toplam}\) ile çarpmak derişimi µmol ürüne dönüştürür. \(t\) süresine bölünce µmol/dak (yani birim, U) elde edilir; \(V_{enzim}\) hacmine bölmek ise sonucu mL enzim başına aktiviteye normalize eder.
Örnek Hesaplama
Diyelim ki \(\Delta A = 0{,}3\), \(t = 1\) dak, \(\varepsilon = 6{,}22\) mM⁻¹·cm⁻¹ (340 nm'de NADH), \(l = 1\) cm, \(V_{toplam} = 3\) mL ve \(V_{enzim} = 0{,}1\) mL olsun. Bu durumda $$\text{aktivite} = \dfrac{0{,}3 \times 3}{6{,}22 \times 1 \times 1 \times 0{,}1} = \dfrac{0{,}9}{0{,}622} \approx 1{,}447 \text{ U/mL}$$ olur. Toplam küvet hızı ise \(0{,}9 / 6{,}22 \approx 0{,}1447\) µmol/dak'dır.
Sık Sorulan Sorular
\(\varepsilon\) hangi birimde olmalı? U/mL elde etmek için \(\varepsilon\)'yi mM⁻¹·cm⁻¹, hacimleri ise mL biriminde kullanın. 340 nm'de NADH için \(\varepsilon = 6{,}22\) mM⁻¹·cm⁻¹'dir.
Bir birim (U) nedir? Bir birim, tayin koşulları altında dakikada 1 µmol substrat dönüştüren enzim miktarıdır.
Spesifik aktiviteyi nasıl bulurum? U/mg cinsinden spesifik aktiviteyi elde etmek için U/mL sonucunu enzim örneğinizin protein derişimine (mg/mL) bölün.
