एंजाइम गतिविधि कैलकुलेटर क्या है?
यह टूल मापता है कि कोई एंजाइम कितनी तेज़ी से सब्सट्रेट को परिवर्तित करता है, जिसे अंतरराष्ट्रीय इकाइयों (U) में दर्शाया जाता है, जहाँ 1 U = प्रति मिनट परिवर्तित 1 µmol सब्सट्रेट होता है। यह बीयर–लैम्बर्ट नियम लागू करके मापे गए अवशोषण (absorbance) परिवर्तन को उत्पाद की मोलर मात्रा में बदलता है और फिर उस दर को प्रयुक्त एंजाइम के आयतन के अनुसार सामान्यीकृत करता है। यह एक सार्वभौमिक जैव-रसायन/एंजाइमोलॉजी टूल है और किसी विशेष देश तक सीमित नहीं है।
इसका उपयोग कैसे करें
अपना स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक परख (assay) चलाएँ और एक निश्चित समय में अवशोषण परिवर्तन (ΔA) दर्ज करें। ΔA, मिनटों में अभिक्रिया का समय, अपने क्रोमोफोर का मोलर विलोपन गुणांक ε (mM⁻¹·cm⁻¹ में), क्यूवेट की पथ लंबाई (आमतौर पर 1 cm), कुल अभिक्रिया आयतन, और मिलाए गए एंजाइम नमूने का आयतन भरें। यह सुनिश्चित करें कि ε और आपके आयतन की इकाइयाँ आपस में संगत हों ताकि परिणाम U/mL में आए।
सूत्र की व्याख्या
$$\text{गतिविधि (U/mL)} = \dfrac{\Delta A \times V_{\text{कुल}}}{\varepsilon \times l \times t \times V_{\text{एंजाइम}}}$$ यहाँ पद \(\Delta A / (\varepsilon \times l)\) बीयर के नियम से उत्पाद की सांद्रता (mM) में परिवर्तन देता है। इसे \(V_{\text{कुल}}\) से गुणा करने पर सांद्रता उत्पाद के µmol में बदल जाती है। समय \(t\) से भाग देने पर µmol/min (इकाइयाँ, U) मिलती हैं, और \(V_{\text{एंजाइम}}\) से भाग देने पर प्रति mL एंजाइम की गतिविधि के रूप में सामान्यीकरण हो जाता है।
हल किया गया उदाहरण
मान लीजिए \(\Delta A = 0.3\), \(t = 1\ \text{min}\), \(\varepsilon = 6.22\ \text{mM}^{-1}\cdot\text{cm}^{-1}\) (340 nm पर NADH), \(l = 1\ \text{cm}\), \(V_{\text{कुल}} = 3\ \text{mL}\), और \(V_{\text{एंजाइम}} = 0.1\ \text{mL}\)। तब $$\text{गतिविधि} = \dfrac{0.3 \times 3}{6.22 \times 1 \times 1 \times 0.1} = \dfrac{0.9}{0.622} \approx 1.447\ \text{U/mL}$$ क्यूवेट की कुल दर \(0.9 / 6.22 \approx 0.1447\ \text{µmol/min}\) होती है।
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
ε किन इकाइयों में होना चाहिए? U/mL प्राप्त करने के लिए ε को mM⁻¹·cm⁻¹ में और आयतन को mL में रखें। 340 nm पर NADH का मान 6.22 mM⁻¹·cm⁻¹ होता है।
एक इकाई (U) क्या है? एक इकाई एंजाइम की वह मात्रा है जो परख की स्थितियों में प्रति मिनट 1 µmol सब्सट्रेट को परिवर्तित करती है।
विशिष्ट गतिविधि कैसे निकालें? U/mg प्राप्त करने के लिए U/mL के परिणाम को अपने एंजाइम नमूने की प्रोटीन सांद्रता (mg/mL) से भाग दें।
