酵素活性計算ツールとは？
このツールは、酵素が基質をどれだけ速く変換するかを国際単位（U）で求めるものです。ここで1 U＝1分間に1 µmolの基質を変換する量と定義されます。ランベルト・ベールの法則を用いて、測定した吸光度変化を生成物のモル量に換算し、使用した酵素量で規格化して活性を算出します。生化学・酵素学で世界共通に使われる計算ツールで、特定の国に限定されるものではありません。
使い方
分光光度計でアッセイを行い、一定時間内の吸光度変化（ΔA）を記録します。ΔA、反応時間（分）、対象とする発色団のモル吸光係数ε（mM⁻¹·cm⁻¹）、セルの光路長（通常は1 cm）、反応液全量、添加した酵素サンプルの容量を入力してください。結果をU/mLで得るには、εと各容量の単位をそろえておくことが大切です。
計算式の解説
$$\text{活性 (U/mL)} = \dfrac{\Delta A \times V_{total}}{\varepsilon \times l \times t \times V_{enzyme}}$$このうち \(\Delta A /(\varepsilon \times l)\) は、ベールの法則から求まる生成物の濃度変化（mM）を表します。これに \(V_{total}\) を掛けると、濃度が生成物のµmol量に換算されます。さらに反応時間 \(t\) で割れば µmol/分（すなわち単位 U）となり、酵素容量 \(V_{enzyme}\) で割ることで酵素1 mLあたりの活性に規格化されます。
計算例
例として、\(\Delta A = 0.3\)、\(t = 1\) 分、\(\varepsilon = 6.22\ \text{mM}^{-1}\cdot\text{cm}^{-1}\)（340 nmにおけるNADH）、\(l = 1\) cm、\(V_{total} = 3\) mL、\(V_{enzyme} = 0.1\) mL とします。このとき$$\text{活性} = \dfrac{0.3 \times 3}{6.22 \times 1 \times 1 \times 0.1} = \dfrac{0.9}{0.622} \approx 1.447\ \text{U/mL}$$となります。セル全体の反応速度は \(0.9 / 6.22 \approx 0.1447\) µmol/分です。
よくある質問
εの単位は何にすればよいですか？ U/mLを得るには、mM⁻¹·cm⁻¹を用い、容量はmLでそろえます。340 nmのNADHでは6.22 mM⁻¹·cm⁻¹です。
1単位（U）とは何ですか？ 1単位とは、そのアッセイ条件下で1分間に1 µmolの基質を変換する酵素量を指します。
比活性はどう求めますか？ 得られたU/mLを酵素サンプルのタンパク質濃度（mg/mL）で割ると、U/mg（比活性）が得られます。
