¿Qué es la calculadora de actividad enzimática?
Esta herramienta mide la rapidez con la que una enzima transforma el sustrato, expresada en unidades internacionales (U), donde 1 U = 1 µmol de sustrato transformado por minuto. Aplica la ley de Beer–Lambert para convertir el cambio de absorbancia medido en una cantidad molar de producto y, después, normaliza esa velocidad según el volumen de enzima empleado. Es una herramienta universal de bioquímica y enzimología, sin vinculación a ningún país en concreto.
Cómo utilizarla
Realiza tu ensayo espectrofotométrico y registra el cambio de absorbancia (ΔA) durante un tiempo fijo. Introduce ΔA, el tiempo de reacción en minutos, el coeficiente de extinción molar ε de tu cromóforo (en mM⁻¹·cm⁻¹), el paso óptico de la cubeta (normalmente 1 cm), el volumen total de reacción y el volumen de muestra enzimática añadido. Asegúrate de que ε y los volúmenes mantengan unidades coherentes para que el resultado salga en U/mL.
La fórmula explicada
$$\text{Actividad (U/mL)} = \dfrac{\Delta A \times V_{total}}{\varepsilon \times l \times t \times V_{enzima}}$$ El término \(\Delta A / (\varepsilon \times l)\) proporciona el cambio de concentración (mM) del producto según la ley de Beer. Al multiplicarlo por \(V_{total}\) se convierte la concentración en µmol de producto. Al dividir entre el tiempo \(t\) se obtienen µmol/min (unidades, U), y al dividir entre \(V_{enzima}\) se normaliza a la actividad por mL de enzima.
Ejemplo resuelto
Supongamos que \(\Delta A = 0{,}3\), \(t = 1\) min, \(\varepsilon = 6{,}22\) mM⁻¹·cm⁻¹ (NADH a 340 nm), \(l = 1\) cm, \(V_{total} = 3\) mL y \(V_{enzima} = 0{,}1\) mL. Entonces la actividad $$\text{actividad} = \dfrac{0{,}3 \times 3}{6{,}22 \times 1 \times 1 \times 0{,}1} = \dfrac{0{,}9}{0{,}622} \approx 1{,}447 \text{ U/mL}.$$ La velocidad total en la cubeta es \(0{,}9 / 6{,}22 \approx 0{,}1447\) µmol/min.
Preguntas frecuentes
¿En qué unidades debe estar ε? Usa mM⁻¹·cm⁻¹ junto con volúmenes en mL para obtener U/mL. El NADH a 340 nm tiene un valor de 6,22 mM⁻¹·cm⁻¹.
¿Qué es una unidad (U)? Una unidad es la cantidad de enzima que transforma 1 µmol de sustrato por minuto en las condiciones del ensayo.
¿Cómo obtengo la actividad específica? Divide el resultado en U/mL entre la concentración de proteína (mg/mL) de tu muestra enzimática para obtener U/mg.
