À quoi sert ce calculateur
Cet outil détermine la concentration molaire d'une substance en solution à partir de son absorbance mesurée, en s'appuyant sur la loi de Beer-Lambert. Il est très utilisé en chimie analytique, en biochimie et en spectrophotométrie pour transformer des lectures UV-visible en valeurs de concentration exploitables.
Comment l'utiliser
Renseignez trois valeurs : l'absorbance (A), une lecture sans dimension fournie par votre spectrophotomètre ; le coefficient d'absorption molaire (ε), une constante propre à l'analyte à la longueur d'onde choisie, exprimée en L·mol⁻¹·cm⁻¹ ; et le trajet optique (l), c'est-à-dire la largeur de la cuve en centimètres (généralement 1 cm). Le calculateur renvoie la concentration en mol/L et la convertit également en micromolaire (µM) pour plus de commodité.
La formule expliquée
La loi de Beer-Lambert s'écrit \(A = \varepsilon \cdot l \cdot c\). En isolant la concentration, on obtient $$c = \frac{A}{\varepsilon \cdot l}$$ L'absorbance augmente de façon linéaire avec la concentration, tant que la solution n'est pas trop concentrée. Le coefficient d'absorption molaire traduit l'intensité avec laquelle une espèce chimique absorbe la lumière à une longueur d'onde donnée, tandis que le trajet optique correspond à la distance parcourue par la lumière à travers l'échantillon.
Exemple concret
Imaginons que vous mesuriez une absorbance \(A = 0{,}63\) pour une protéine à 280 nm, avec un coefficient d'absorption molaire \(\varepsilon = 6300\ \text{L}\cdot\text{mol}^{-1}\cdot\text{cm}^{-1}\) dans une cuve standard de 1 cm. On obtient alors $$c = \frac{0{,}63}{6300 \times 1} = 0{,}0001\ \text{mol/L} = 100\ \text{µM}$$
FAQ
Quelles unités utiliser ? Utilisez des L·mol⁻¹·cm⁻¹ pour ε et des cm pour le trajet optique afin d'obtenir une concentration en mol/L.
Pourquoi mon résultat est-il négatif ou nul ? Une correction du blanc (solution de référence) peut être nécessaire ; vérifiez aussi que ε et le trajet optique sont des nombres positifs non nuls.
La loi est-elle toujours valable ? La linéarité de Beer-Lambert n'est plus respectée aux fortes concentrations (généralement A > 1), à cause de la diffusion et des interactions entre molécules d'analyte ; diluez donc l'échantillon si nécessaire.
