Công cụ này dùng để làm gì
Công cụ này tính nồng độ mol của một chất trong dung dịch dựa trên độ hấp thụ đo được, áp dụng định luật Beer-Lambert. Đây là phép tính quen thuộc trong hóa phân tích, hóa sinh và quang phổ, giúp chuyển các số đo UV-Vis thành giá trị nồng độ có ý nghĩa thực tế.
Cách sử dụng
Bạn cần nhập ba giá trị: độ hấp thụ (A) — chỉ số không thứ nguyên đọc được từ máy quang phổ; hệ số hấp thụ mol (ε) — hằng số đặc trưng của chất phân tích tại bước sóng đã chọn, tính bằng L·mol⁻¹·cm⁻¹; và chiều dài quang trình (l) — bề rộng của cuvet tính bằng centimét (thường là 1 cm). Công cụ sẽ trả về nồng độ theo mol/L, đồng thời quy đổi sang micromol (µM) để bạn tiện theo dõi.
Giải thích công thức
Định luật Beer-Lambert được phát biểu là \(A = \varepsilon \cdot l \cdot c\). Biến đổi để tìm nồng độ ta được
$$c = \frac{\text{Absorbance (A)}}{\text{Molar Absorptivity } \varepsilon \times \text{Path Length } l}$$Độ hấp thụ tăng tuyến tính theo nồng độ miễn là dung dịch không quá đặc. Hệ số hấp thụ mol cho biết một chất hấp thụ ánh sáng mạnh đến mức nào tại bước sóng nhất định, còn chiều dài quang trình phản ánh quãng đường ánh sáng đi qua mẫu.
Ví dụ minh họa
Giả sử bạn đo được độ hấp thụ \(A = 0{,}63\) của một protein tại bước sóng 280 nm, với hệ số hấp thụ mol \(\varepsilon = 6300\) L·mol⁻¹·cm⁻¹ trong cuvet tiêu chuẩn 1 cm. Khi đó
$$c = \frac{0{,}63}{6300 \times 1} = 0{,}0001 \text{ mol/L} = 100 \text{ µM}$$Câu hỏi thường gặp
Nên dùng đơn vị nào? Hãy dùng L·mol⁻¹·cm⁻¹ cho ε và cm cho chiều dài quang trình để thu được nồng độ theo mol/L.
Tại sao kết quả của tôi bằng 0 hoặc âm? Có thể bạn cần hiệu chỉnh độ hấp thụ với mẫu trắng (blank); đồng thời hãy kiểm tra ε và chiều dài quang trình đều là số dương khác 0.
Định luật có luôn đúng không? Tính tuyến tính của Beer-Lambert không còn đúng ở nồng độ cao (thường khi \(A > 1\)) do hiện tượng tán xạ và tương tác giữa các phân tử chất phân tích, vì vậy hãy pha loãng mẫu khi cần.
