Калькулятор концентрации белка

Введите расчет

Поглощение при 280 нм (A280)

Коэффициент экстинкции (мл·мг⁻¹·см⁻¹)

Длина оптического пути (см)

Результатов

Концентрация белка

0,714

мг/мл

Концентрация (мкг/мл)	714,29

Что такое калькулятор концентрации белка?

Этот калькулятор оценивает концентрацию белкового раствора по его поглощению на длине волны 280 нм (A280), измеренному на УФ-спектрофотометре. Ароматические аминокислотные остатки — триптофан, тирозин и в небольшой степени цистеин — поглощают свет при 280 нм, поэтому поглощение прямо пропорционально концентрации белка. Используя закон Бугера–Ламберта–Бера, вы можете перевести показание в миллиграммы на миллилитр (мг/мл), зная массовый коэффициент экстинкции белка.

Как пользоваться калькулятором

Введите три значения: измеренное поглощение (A280), массовый коэффициент экстинкции \(\varepsilon\) (в мл·мг⁻¹·см⁻¹) и длину оптического пути кюветы (обычно 1 см). Универсальное приближённое значение \(\varepsilon\) — 1,0 (исходя из допущения «1 мг/мл = 1 единица поглощения»), а для IgG часто берут ~1,4. Калькулятор выдаёт концентрацию в мг/мл и мкг/мл.

Разбор формулы

Закон Бугера–Ламберта–Бера гласит: \(A = \varepsilon \times C \times l\), где \(A\) — поглощение, \(\varepsilon\) — коэффициент экстинкции, \(C\) — концентрация, а \(l\) — длина оптического пути. Выразив концентрацию, получаем

$$C = \dfrac{A_{280}}{\varepsilon \times l}$$

При длине пути в 1 см формула упрощается до \(C = \dfrac{A_{280}}{\varepsilon}\).

Закон Бера-Ламберта: поглощение связано с концентрацией, длиной оптического пути (l) и коэффициентом экстинкции (ε).

Пример расчёта

Допустим, вы измерили A280 = 0,700 для антитела с \(\varepsilon\) = 1,4 мл·мг⁻¹·см⁻¹ в кювете с длиной пути 1 см. Тогда

$$C = \dfrac{0{,}700}{1{,}4 \times 1} = 0{,}5 \ \text{мг/мл}$$

то есть 500 мкг/мл.

Спектрофотометр измеряет поглощение A280, которое подставляется в формулу.

Частые вопросы

Какой коэффициент экстинкции использовать? Берите массовый коэффициент именно для вашего белка (обычно из ProtParam или из спецификации поставщика). 1,0 — это грубое значение по умолчанию; 1,4 типично для IgG.

Почему измеряют именно при 280 нм? Ароматические аминокислоты сильно поглощают свет на 280 нм, поэтому эта длина волны стала стандартной для количественного определения белка без меток.

Важна ли длина оптического пути? Да. Большинство кювет имеют путь 1 см, но микрообъёмные приборы (например, NanoDrop) используют более короткий путь, который нужно ввести корректно.