¿Qué es la calculadora de concentración de proteínas?
Esta herramienta estima la concentración de una solución proteica a partir de su absorbancia a 280 nm (A280) medida en un espectrofotómetro UV. Los residuos aromáticos —triptófano, tirosina y, en menor medida, cisteína— absorben luz a 280 nm, de modo que la absorbancia es directamente proporcional a la concentración de proteína. Aplicando la ley de Beer-Lambert, puedes convertir esa lectura en miligramos por mililitro (mg/mL) en cuanto conozcas el coeficiente de extinción másico de la proteína.
Cómo usarla
Introduce tres valores: la absorbancia medida (A280), el coeficiente de extinción másico \(\varepsilon\) (en mL·mg⁻¹·cm⁻¹) y la longitud de paso de la cubeta (normalmente 1 cm). Un valor genérico habitual de \(\varepsilon\) es 1,0, partiendo del supuesto «1 mg/mL = 1 UA», mientras que para la IgG suele tomarse ~1,4. La calculadora devuelve la concentración en mg/mL y en µg/mL.
La fórmula explicada
La ley de Beer-Lambert establece que \(A = \varepsilon \times C \times l\), donde \(A\) es la absorbancia, \(\varepsilon\) el coeficiente de extinción, \(C\) la concentración y \(l\) la longitud de paso. Si despejamos la concentración, obtenemos $$C = \dfrac{A_{280}}{\varepsilon \times l}$$ Cuando la longitud de paso es de 1 cm, la expresión se simplifica a \(C = \dfrac{A_{280}}{\varepsilon}\).
Ejemplo resuelto
Imagina que mides A280 = 0,700 para un anticuerpo con \(\varepsilon\) = 1,4 mL·mg⁻¹·cm⁻¹ en una cubeta de 1 cm. Entonces $$C = \dfrac{0{,}700}{1{,}4 \times 1} = 0{,}5 \text{ mg/mL}$$ es decir, 500 µg/mL.
Preguntas frecuentes
¿Qué coeficiente de extinción debo usar? Utiliza el coeficiente másico específico de tu proteína (a menudo de ProtParam o de la ficha técnica del proveedor). El valor 1,0 es una aproximación general; 1,4 es típico para la IgG.
¿Por qué se mide a 280 nm? Los aminoácidos aromáticos absorben con fuerza a 280 nm, lo que la convierte en la longitud de onda estándar para cuantificar proteínas sin marcaje.
¿Importa la longitud de paso? Sí. La mayoría de las cubetas son de 1 cm, pero los equipos de microvolumen (como el NanoDrop) emplean longitudes de paso más cortas que hay que introducir correctamente.
