ما هي حاسبة تركيز البروتين؟
تقدّر هذه الحاسبة تركيز محلول البروتين انطلاقًا من قيمة امتصاصه عند الطول الموجي 280 نانومتر (A280) المقاسة بمطياف الأشعة فوق البنفسجية. تمتص الأحماض الأمينية العطرية — التريبتوفان والتيروسين، وبدرجة أقل السيستئين — الضوء عند 280 نانومتر، ولذلك يتناسب الامتصاص طرديًا مع تركيز البروتين. وبالاعتماد على قانون بير-لامبرت، يمكنك تحويل القراءة إلى ملليغرامات لكل ملليلتر (ملغ/مل) بمجرد معرفتك معامل الانطفاء الكتلي للبروتين.
كيفية الاستخدام
أدخل ثلاث قيم: الامتصاص المقاس (A280)، ومعامل الانطفاء الكتلي \(\varepsilon\) (بوحدة مل·ملغ⁻¹·سم⁻¹)، وطول مسار الخلية المقياسية (الكوفيت)، وهو عادةً 1 سم. من القيم العامة الشائعة لـ \(\varepsilon\) القيمة 1.0 وفق افتراض "1 ملغ/مل = 1 وحدة امتصاص"، بينما يُؤخذ معامل الأجسام المضادة من نوع IgG عادةً بنحو 1.4. تُرجع الحاسبة التركيز بوحدتي ملغ/مل وميكروغرام/مل.
شرح المعادلة
ينص قانون بير-لامبرت على أن \(A = \varepsilon \times C \times l\)، حيث \(A\) هو الامتصاص، و\(\varepsilon\) معامل الانطفاء، و\(C\) التركيز، و\(l\) طول المسار. وبإعادة ترتيب المعادلة لاستخراج التركيز نحصل على $$C = \dfrac{A_{280}}{\varepsilon \times l}$$ وعندما يكون طول المسار 1 سم، تتبسّط المعادلة إلى \(C = \dfrac{A_{280}}{\varepsilon}\).
مثال محلول
لنفترض أنك قست \(A_{280} = 0.700\) لجسم مضاد بمعامل \(\varepsilon = 1.4\) مل·ملغ⁻¹·سم⁻¹ في خلية مقياسية طولها 1 سم. عندئذٍ يكون $$C = \dfrac{0.700}{1.4 \times 1} = 0.5 \text{ ملغ/مل}$$ أي 500 ميكروغرام/مل.
الأسئلة الشائعة
أي معامل انطفاء ينبغي أن أستخدم؟ استخدم المعامل الكتلي الخاص ببروتينك تحديدًا (يُؤخذ غالبًا من أداة ProtParam أو من نشرة بيانات المورِّد). القيمة 1.0 افتراض تقريبي، بينما 1.4 قيمة نموذجية للأجسام المضادة من نوع IgG.
لماذا يُقاس عند 280 نانومتر؟ تمتص الأحماض الأمينية العطرية الضوء بقوة عند 280 نانومتر، ما يجعله الطول الموجي القياسي لقياس كمية البروتين دون الحاجة إلى وسم.
هل يؤثر طول المسار؟ نعم — معظم الخلايا المقياسية بطول 1 سم، لكن الأجهزة التي تعمل بأحجام صغيرة جدًا (مثل جهاز NanoDrop) تستخدم مسارات أقصر يجب إدخالها بدقة.
