단백질 농도 계산기란?
이 계산기는 UV 분광광도계로 측정한 280nm 흡광도(A280) 값을 이용해 단백질 용액의 농도를 추정합니다. 트립토판, 티로신, 그리고 소량의 시스테인 같은 방향족 아미노산 잔기는 280nm 파장의 빛을 흡수하기 때문에, 흡광도는 단백질 농도와 정비례 관계를 가집니다. 단백질의 질량 흡광계수만 알고 있다면 비어-람베르트 법칙을 통해 측정값을 밀리그램/밀리리터(mg/mL) 단위로 환산할 수 있습니다.
사용 방법
세 가지 값을 입력하세요. 측정한 흡광도(A280), 질량 흡광계수 \(\varepsilon\)(단위: mL·mg⁻¹·cm⁻¹), 그리고 큐벳의 광로 길이(보통 1cm)입니다. \(\varepsilon\) 값으로는 "1mg/mL = 1AU"를 가정하는 일반적인 기본값 1.0이 흔히 쓰이며, IgG의 경우 약 1.4를 사용하는 경우가 많습니다. 계산기는 농도를 mg/mL와 µg/mL 단위로 함께 보여줍니다.
공식 설명
비어-람베르트 법칙은 \(A = \varepsilon \times C \times l\) 로 표현됩니다. 여기서 \(A\)는 흡광도, \(\varepsilon\)는 흡광계수, \(C\)는 농도, \(l\)는 광로 길이입니다. 이 식을 농도에 대해 정리하면 다음과 같이 됩니다.
$$C = \dfrac{A_{280}}{\varepsilon \times l}$$
광로 길이가 1cm일 때는 식이 \(C = \dfrac{A_{280}}{\varepsilon}\) 로 간단해집니다.
계산 예시
예를 들어 \(\varepsilon = 1.4\) mL·mg⁻¹·cm⁻¹인 항체를 1cm 큐벳에서 측정해 \(A_{280} = 0.700\)이 나왔다고 가정해 봅시다. 이때
$$C = \dfrac{0.700}{1.4 \times 1} = 0.5 \text{ mg/mL}$$
즉 500 µg/mL가 됩니다.
자주 묻는 질문
어떤 흡광계수를 사용해야 하나요? 분석 대상 단백질에 맞는 질량 흡광계수를 사용하세요(주로 ProtParam이나 공급사 데이터시트에서 확인할 수 있습니다). 1.0은 대략적인 기본값이며, IgG에는 보통 1.4가 쓰입니다.
왜 280nm에서 측정하나요? 방향족 아미노산이 280nm에서 강하게 빛을 흡수하기 때문에, 표지 없이 단백질을 정량할 때 표준으로 사용되는 파장입니다.
광로 길이가 중요한가요? 네, 대부분의 큐벳은 1cm이지만 NanoDrop 같은 마이크로볼륨 기기는 더 짧은 광로를 사용하므로, 해당 값을 정확히 입력해야 합니다.
