Qu'est-ce que le calculateur de concentration protéique ?
Cet outil estime la concentration d'une solution protéique à partir de son absorbance à 280 nm (A280) mesurée au spectrophotomètre UV. Les résidus aromatiques — le tryptophane, la tyrosine et, dans une moindre mesure, la cystéine — absorbent la lumière à 280 nm : l'absorbance est donc directement proportionnelle à la concentration en protéines. En appliquant la loi de Beer-Lambert, vous convertissez cette mesure en milligrammes par millilitre (mg/mL) dès lors que vous connaissez le coefficient d'extinction massique de la protéine.
Comment l'utiliser ?
Renseignez trois valeurs : l'absorbance mesurée (A280), le coefficient d'extinction massique \(\varepsilon\) (en mL·mg⁻¹·cm⁻¹) et la longueur du trajet optique de la cuve (généralement 1 cm). Une valeur générique courante pour \(\varepsilon\) est 1,0, qui correspond à l'hypothèse « 1 mg/mL = 1 unité d'absorbance », tandis qu'on retient souvent ~1,4 pour les IgG. Le calculateur affiche la concentration en mg/mL et en µg/mL.
La formule expliquée
La loi de Beer-Lambert s'écrit \(A = \varepsilon \times C \times l\), où \(A\) est l'absorbance, \(\varepsilon\) le coefficient d'extinction, \(C\) la concentration et \(l\) la longueur du trajet optique. En isolant la concentration, on obtient $$C = \frac{A_{280}}{\varepsilon \times l}$$ Lorsque le trajet optique vaut 1 cm, l'expression se simplifie en \(C = \frac{A_{280}}{\varepsilon}\).
Exemple concret
Supposons que vous mesuriez A280 = 0,700 pour un anticorps dont \(\varepsilon\) = 1,4 mL·mg⁻¹·cm⁻¹ dans une cuve de 1 cm. Alors $$C = \frac{0{,}700}{1{,}4 \times 1} = 0{,}5 \text{ mg/mL}$$ soit 500 µg/mL.
FAQ
Quel coefficient d'extinction utiliser ? Utilisez le coefficient massique propre à votre protéine (souvent issu de ProtParam ou de la fiche technique du fournisseur). La valeur 1,0 est une approximation par défaut ; 1,4 est typique des IgG.
Pourquoi mesurer à 280 nm ? Les acides aminés aromatiques absorbent fortement à 280 nm, ce qui en fait la longueur d'onde de référence pour quantifier les protéines sans marquage.
La longueur du trajet optique compte-t-elle ? Oui — la plupart des cuves font 1 cm, mais les instruments micro-volume (comme le NanoDrop) utilisent des trajets plus courts, qu'il faut saisir correctement.
