Qu'est-ce que le calculateur de concentration d'ARN ?
Cet outil estime la concentration d'un échantillon d'ARN à partir de son absorbance à 260 nm (A260) mesurée sur un spectrophotomètre UV de type NanoDrop. Il s'appuie sur le facteur de conversion standard, fondé sur le coefficient d'extinction, pour l'ARN simple brin : une A260 de 1,0 correspond à environ 40 ng/µL d'ARN. Le calculateur est universel et convient à n'importe quel laboratoire, partout dans le monde.
Comment l'utiliser
Saisissez la valeur A260 mesurée, le facteur de dilution appliqué avant la lecture (indiquez 1 si l'échantillon a été lu non dilué) et, si vous le souhaitez, le volume de l'échantillon en microlitres pour calculer le rendement total en ARN. Le calculateur affiche la concentration en ng/µL (équivalente à µg/mL) ainsi que la quantité totale d'ARN récupérée.
La formule expliquée
Concentration d'ARN (ng/µL) = A260 × 40 × facteur de dilution.
$$\text{Concentration} = \text{A260} \times 40 \times \text{Dilution} \;\;\text{(ng/}\mu\text{L)}$$Le facteur 40 correspond au coefficient d'extinction déterminé empiriquement pour l'ARN simple brin à 260 nm, dans une cuve de 1 cm de trajet optique. Rendement total (µg) = concentration (ng/µL) × volume (µL) ÷ 1000.
$$\text{Rendement (}\mu\text{g)} = \frac{\left(\text{A260} \times 40 \times \text{Dilution}\right) \times \text{Volume }(\mu\text{L})}{1000}$$
Exemple chiffré
Supposons une A260 = 0,25, un facteur de dilution = 50 et un volume = 100 µL. Concentration = \(0{,}25 \times 40 \times 50 = 500\) ng/µL. Rendement total = \(500 \times 100 \div 1000 = 50\) µg d'ARN.
FAQ
Pourquoi 40 et non 50 ? Le facteur 50 s'applique à l'ADN double brin ; l'ARN simple brin absorbe légèrement différemment, c'est pourquoi la constante retenue est de 40 ng/µL par unité d'A260.
Et la pureté ? L'A260 seule donne la concentration ; vérifiez le rapport A260/A280 (~2,0 pour un ARN pur) et le rapport A260/A230 pour évaluer une éventuelle contamination.
Le trajet optique a-t-il une importance ? Le facteur suppose un trajet optique standard de 1 cm. Les appareils modernes à micro-volumes ramènent automatiquement les lectures à 1 cm.
