À quoi sert le calculateur de concentration d'ADN ?
Cet outil estime la concentration d'ADN double brin (ADNdb) dans un échantillon à partir de son absorbance mesurée à 260 nm (A260) au spectrophotomètre, qu'il s'agisse d'un NanoDrop ou d'un appareil UV à cuve. Les acides nucléiques absorbent fortement la lumière UV à 260 nm, et cette absorbance est directement proportionnelle à la concentration : c'est pourquoi elle constitue la méthode rapide de référence pour quantifier l'ADN dans les laboratoires de biologie moléculaire.
Comment l'utiliser
Saisissez la valeur d'absorbance A260 affichée par votre spectrophotomètre. Indiquez ensuite le facteur de dilution : si vous avez dilué l'échantillon au 1:10 avant la lecture, le facteur est de 10 ; si vous l'avez mesuré pur, utilisez 1. Vous pouvez aussi renseigner le volume total de l'échantillon en microlitres pour estimer la quantité totale d'ADN récupérée. L'outil affiche la concentration en ng/µL (numériquement équivalente aux µg/mL) ainsi que la masse totale.
La formule expliquée
Le calcul s'écrit $$\text{Concentration (ng/µL)} = A_{260} \times 50 \times \text{facteur de dilution}$$. Le coefficient 50 est la constante de conversion propre à l'ADNdb : un échantillon avec un trajet optique de 1 cm et une A260 exactement égale à \(1{,}0\) contient environ 50 ng/µL d'ADN double brin. Pour de l'ADN simple brin, on utiliserait 33, et pour l'ARN 40, mais cet outil part du principe qu'il s'agit d'ADNdb. La quantité totale en microgrammes correspond à \(\text{concentration} \times \text{volume} \div 1000\).
Exemple concret
Imaginons que votre NanoDrop affiche une A260 de 0,5 sur un échantillon dilué au 1:10, pour un volume final de 50 µL. $$\text{Concentration} = 0{,}5 \times 50 \times 10 = \mathbf{250\ \text{ng/µL}}$$ Quantité totale = \(250 \times 50 \div 1000 = 12{,}5\ \text{µg}\).
Questions fréquentes
Pourquoi 50 ? C'est le facteur d'extinction établi empiriquement pour l'ADNdb à 260 nm avec un trajet optique de 1 cm.
Quel facteur de dilution si je n'ai pas dilué l'échantillon ? Utilisez 1.
Les ng/µL équivalent-ils aux µg/mL ? Oui, les deux unités sont numériquement identiques : 250 ng/µL correspondent donc à 250 µg/mL.
