什麼是 DNA 濃度計算機?
這個計算機可以根據樣本在 260 nm 波長下的吸光值(A260),估算雙股 DNA(dsDNA)的濃度。A260 讀值通常由分光光度計量測而得,例如 NanoDrop 或使用比色皿的紫外光儀器。核酸在 260 nm 波長下對紫外光有強烈吸收,且吸光值與濃度成正比,因此這是分子生物學實驗室中最常用、也最快速的 DNA 定量方法。
使用方法
輸入分光光度計顯示的 A260 吸光值。接著填入稀釋倍數——如果你在量測前將樣本以 1:10 稀釋,倍數就是 10;若是直接量測未稀釋的原液,則填 1。你也可以選擇性地輸入樣本總體積(單位為微升 µL),以一併估算 DNA 的總產量。本工具會回傳以 ng/µL 表示的濃度(數值上等同於 µg/mL),以及 DNA 的總質量。
公式說明
計算方式為 濃度(ng/µL)= A260 × 50 × 稀釋倍數。
$$\text{濃度 (ng/µL)} = A_{260} \times 50 \times \text{稀釋倍數}$$其中 50 是 dsDNA 的轉換係數:在光徑長度為 1 cm 的條件下,當 A260 恰好為 1.0 時,樣本中約含有 50 ng/µL 的雙股 DNA。若是單股 DNA,係數應改為 33;RNA 則為 40。本工具預設計算的對象為雙股 DNA(dsDNA)。以微克(µg)表示的總產量則為 濃度 × 體積 ÷ 1000。
$$\text{產量}_{\mu g} = \frac{C \times V}{1000}$$
實際範例
假設你的 NanoDrop 在 1:10 稀釋的樣本上讀到 A260 為 0.5,最終體積為 50 µL。則濃度 = \(0.5 \times 50 \times 10 = \) 250 ng/µL。總產量 = \(250 \times 50 \div 1000 = 12.5\) µg。
常見問題
為什麼是 50?這是雙股 DNA 在 260 nm 波長、1 cm 光徑長度下,經實驗驗證所建立的消光係數。
如果我沒有稀釋,稀釋倍數要填多少?填 1。
ng/µL 跟 µg/mL 是一樣的嗎?是的——兩者在數值上完全相同,所以 250 ng/µL 就等於 250 µg/mL。