什麼是 RNA 濃度計算器?
這款計算器可根據 UV 分光光度計(例如 NanoDrop)量測到的 260 nm 吸光值(A260),估算 RNA 樣品的濃度。它採用單股 RNA 的標準消光換算係數:當 A260 為 1.0 時,約相當於 40 ng/µL 的 RNA。本工具適用於全球任何實驗室,沒有地區限制。
使用方式
輸入量測到的 A260 數值與讀數前所使用的稀釋倍數(若樣品未稀釋直接讀取,請填 1),並可選擇輸入樣品體積(微升, µL)以計算 RNA 總回收量。計算器會回傳以 ng/µL 表示的濃度(等同於 µg/mL),以及回收到的 RNA 總量。
公式說明
RNA 濃度(ng/µL):
$$\text{Concentration} = \text{A260} \times 40 \times \text{Dilution} \;\;\text{(ng/}\mu\text{L)}$$其中係數 40 是單股 RNA 在 260 nm、1 cm 光徑比色槽下,經實驗推導出的消光係數常數。RNA 總量(µg):
$$\text{Yield (}\mu\text{g)} = \frac{\left(\text{A260} \times 40 \times \text{Dilution}\right) \times \text{Volume }(\mu\text{L})}{1000}$$
實際範例
假設 \(\text{A260} = 0.25\)、稀釋倍數 = 50、體積 = 100 µL。濃度:
$$0.25 \times 40 \times 50 = 500 \;\text{ng/}\mu\text{L}$$總回收量:
$$500 \times 100 \div 1000 = 50 \;\mu\text{g}$$的 RNA。
常見問題
為什麼是 40,而不是 50?係數 50 是用於雙股 DNA 的;單股 RNA 的吸光特性略有不同,因此業界公認以每單位 A260 對應 40 ng/µL 作為常數。
純度該如何判斷?A260 只能反映濃度;建議再檢查 A260/A280 比值(純 RNA 約為 2.0)以及 A260/A230 比值,以評估是否受到污染。
光徑長度有沒有影響?此係數假設使用標準 1 cm 光徑。現代微量體積儀器會自動將讀數換算為 1 cm 光徑。