RNA浓度计算器是什么?
这款计算器可根据样本在260 nm处的吸光度(A260)估算RNA浓度,A260通常由NanoDrop等紫外分光光度计测得。它采用单链RNA的标准消光换算系数:当A260为1.0时,约对应40 ng/µL的RNA。该工具通用,适用于全球任何实验室。
使用方法
输入测得的A260数值、读数前所用的稀释倍数(若样本未稀释直接测定,则填1),并可选择性地填入以微升(µL)为单位的样本体积,以计算RNA总产量。计算器会返回以ng/µL(等同于µg/mL)表示的浓度,以及回收得到的RNA总量。
公式详解
RNA浓度(ng/µL):
$$\text{Concentration} = \text{A260} \times 40 \times \text{Dilution} \;\;\text{(ng/}\mu\text{L)}$$其中系数40是单链RNA在260 nm、1 cm光程比色皿条件下经实验测定的消光系数。总产量(µg):
$$\text{Yield (}\mu\text{g)} = \frac{\left(\text{A260} \times 40 \times \text{Dilution}\right) \times \text{Volume }(\mu\text{L})}{1000}$$
实例演算
假设A260 = 0.25,稀释倍数 = 50,体积 = 100 µL。则浓度:
$$0.25 \times 40 \times 50 = 500 \;\text{ng/}\mu\text{L}$$总产量:
$$500 \times 100 \div 1000 = 50 \;\mu\text{g RNA}$$
常见问题
为什么用40而不是50?系数50适用于双链DNA;单链RNA的吸光特性略有不同,因此每单位A260对应40 ng/µL是公认的常数。
纯度如何判断?仅凭A260只能得到浓度;要评估纯度和污染情况,需查看A260/A280比值(纯RNA约为2.0)以及A260/A230比值。
光程有影响吗?该系数以标准1 cm光程为前提。现代微量检测仪器会自动将读数归一化到1 cm光程。