什么是 A260/A280 比值？
A260/A280 比值是评估核酸纯度的一种快速分光光度法指标。核酸在 260 nm 处对紫外光有很强的吸收，而蛋白质（主要因为色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸）则在 280 nm 处吸收。用 260 nm 处的吸光度除以 280 nm 处的吸光度，得到的比值可以反映 DNA 或 RNA 样品中蛋白质或其他污染物的多少。
如何使用本计算器
用紫外分光光度计（例如 NanoDrop）检测样品，记录 260 nm 和 280 nm 处的吸光度值。将这两个数值填入上方，计算器会立即给出比值。建议使用经过空白校正、稀释适当的样品，以确保读数准确。
计算公式详解
计算方法非常简单：
$$\text{Ratio} = \dfrac{A_{260}}{A_{280}}$$由于这是同一样品两个吸光度的比值，光程和浓度在相除时基本抵消，因此该比值是一个不受样品浓度影响的稳健质量指标。
如何解读结果
对于 DNA，比值约为 1.8 通常被认为是"纯净"的；对于 RNA，则约为 2.0。如果比值明显偏低（例如低于 1.7），可能表明存在蛋白质、苯酚或其他在 280 nm 附近有吸收的污染物。若 DNA 样品的比值高于预期，则可能是受到了 RNA 污染。
实例演示
假设 NanoDrop 测得 \(A_{260} = 1.8\)，\(A_{280} = 1.0\)。则比值为
$$\text{Ratio} = \dfrac{1.8}{1.0} = 1.8$$说明这是较为纯净的基因组 DNA，蛋白质污染很少。
A260/A280 纯度参考值
A260/A280 比值比较了 260 nm（核酸吸收最大值）处的吸光度与 280 nm（蛋白质中芳香族氨基酸的吸收最大值）处的吸光度。由于纯化的 DNA 和 RNA 具有特征性比值，该值是快速分光光度计检查样品清洁度的方法。互补的 A260/A230 比值检测不同类别的污染物（有机化合物和混沌盐），因此这两个比值通常一起报告。
| 样品/条件 | 预期 A260/A280 | 预期 A260/A230 | 解释 |
|---|---|---|---|
| 纯双链 DNA（dsDNA） | ~1.8 | ~2.0–2.2 | 干净的基因组/质粒 DNA 的公认目标 |
| 纯 RNA | ~2.0 | ~2.0–2.2 | 干净的全部/信使 RNA 的公认目标 |
| 纯单链 DNA（ssDNA）/寡核苷酸 | ~1.9 | ~2.0–2.2 | 根据碱基组成在 dsDNA 和 RNA 之间下降 |
| A260/A280 低于 ~1.7 | < 1.7 | — | 可能存在蛋白质、酚或其他 280 nm 吸收剂 |
| A260/A280 高于 ~2.0（DNA） | > 2.0 | — | 可能存在 RNA 残留、降解核苷酸或碱性 pH |
| 低 A260/A230（例如 < 1.8） | — | < 1.8 | 胍盐、酚、EDTA 或碳水化合物污染 |
常见污染物及其影响
- 蛋白质——在 280 nm 处强烈吸收（色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸），使 A260/A280 比值降低至 1.8 以下。
- 酚——酚-氯仿萃取的残留物；它在 270–280 nm 附近吸收，也在 230 nm 处吸收，降低两个比值并增加表观产率。
- 胍/混沌盐和 EDTA——在 230 nm 周围吸收，主要降低 A260/A230 比值，同时使 A260/A280 保持接近正常。
- DNA 制备中的 RNA——将 A260/A280 比值向上推向 2.0，因为 RNA 在此比值处的读数高于 DNA。
计算示例：分光光度计报告 A260 = 0.452 和 A280 = 0.251。纯度比值为 1.80，表示干净的双链 DNA。请注意，只有在 pH ~7.5–8.5 下用适当的缓冲液空白进行读取时，该比值才有意义，因为酸性条件可能会将该值人为降低约 ~0.2–0.3。
常见问题
比值多少代表 DNA 纯净？ 比值在 1.8 左右，说明是纯净的双链 DNA。
RNA 又是多少呢？ 纯净的 RNA 比值通常在 2.0 左右。
是否还需要检查 A260/A230？ 需要——A260/A230 比值（理想范围为 2.0–2.2）有助于检测胍盐、苯酚等有机污染物，而这些污染物往往是 A260/A280 比值无法发现的。
