什么是DNA浓度计算器?
这款计算器根据样品在260 nm波长下的吸光度读数(A260),估算双链DNA(dsDNA)的浓度。A260读数通常来自NanoDrop微量分光光度计或比色皿式紫外分光光度计。核酸在260 nm处对紫外光有很强的吸收,而该吸光度与浓度成正比,因此成为分子生物学实验室中快速定量DNA的标准方法。
如何使用
先填入分光光度计显示的A260吸光度数值;再填入稀释倍数——如果上机前把样品按1:10稀释过,倍数就填10;若直接测原液(未稀释),则填1。如需估算DNA总产量,可选填以微升(µL)为单位的样品总体积。计算器会返回以ng/µL为单位的浓度(数值上等于µg/mL),并给出DNA总质量。
公式解析
计算公式为:$$\text{浓度(ng/µL)} = A_{260} \times 50 \times \text{稀释倍数}$$。其中的系数50是双链DNA的换算常数:在1 cm光程下,A260恰好为1.0的样品大约含有50 ng/µL的双链DNA。若是单链DNA则使用系数33,RNA则使用40,但本工具默认按双链DNA计算。以微克(µg)为单位的总产量 = 浓度 × 体积 ÷ 1000。
实例演算
假设你的NanoDrop在1:10稀释后的样品上读出A260为0.5,最终体积为50 µL。则浓度 $$= 0.5 \times 50 \times 10 = 250 \text{ ng/µL}$$。总产量 $$= \frac{250 \times 50}{1000} = 12.5 \text{ µg}$$。
常见问题
为什么是50?这是双链DNA在260 nm波长、1 cm光程下经实验确定的消光系数。
如果没有稀释,稀释倍数填多少?填1。
ng/µL和µg/mL是一回事吗?是的——两者在数值上完全相等,所以250 ng/µL就等于250 µg/mL。