DNA濃度計算ツールとは?
このツールは、NanoDropやキュベット式UV分光光度計で測定した260 nmの吸光度(A260)から、サンプル中の二本鎖DNA(dsDNA)濃度を推定します。核酸は260 nmの紫外線を強く吸収し、その吸光度は濃度に正比例します。そのため、A260測定は分子生物学の実験室でDNAを手早く定量する標準的な方法として広く使われています。
使い方
まず、分光光度計に表示されたA260吸光度の値を入力します。次に希釈倍率を入力してください。測定前にサンプルを1:10に希釈した場合は「10」、希釈せずそのまま測定した場合は「1」と入力します。さらにサンプルの総容量(µL)を入力すれば、DNAの総収量も合わせて算出できます。結果はng/µL(数値的に等しいµg/mL)と総質量で表示されます。
計算式の解説
計算式は 濃度(ng/µL)= A260 × 50 × 希釈倍率 です。
$$\text{濃度 (ng/µL)} = A_{260} \times 50 \times \text{希釈倍率}$$
係数50はdsDNAの換算定数で、光路長1 cm・A260がちょうど1.0のサンプルにはおよそ50 ng/µLの二本鎖DNAが含まれることを意味します。一本鎖DNAでは33、RNAでは40を使いますが、本ツールはdsDNAを前提としています。総収量(µg)は「濃度 × 容量 ÷ 1000」で求められます。
$$\text{Yield}_{\mu g} = \frac{C \times V}{1000}$$
計算例
たとえばNanoDropでの測定値が\(A_{260} = 0.5\)、サンプルを1:10に希釈し、最終容量が50 µLだったとします。
$$0.5 \times 50 \times 10 = 250 \text{ ng/µL}$$
濃度=250 ng/µL。総収量は
$$\frac{250 \times 50}{1000} = 12.5 \text{ µg}$$
となります。
よくある質問
なぜ50を使うの? 50は、260 nm・光路長1 cmにおけるdsDNAの吸光換算係数として経験的に確立された値だからです。
希釈していない場合の希釈倍率は? 「1」を入力してください。
ng/µLとµg/mLは同じ? はい、数値的にまったく同じです。したがって250 ng/µLは250 µg/mLと等しくなります。