DNA ๋๋ ๊ณ์ฐ๊ธฐ๋?
์ด ๊ณ์ฐ๊ธฐ๋ NanoDrop์ด๋ ํ๋ฒณ ๋ฐฉ์์ UV ๋ถ๊ด๊ด๋๊ณ๋ก ์ธก์ ํ 260 nm ํก๊ด๋(A260) ๊ฐ์ ์ด์ฉํด ์๋ฃ ์ ์ด์ค๊ฐ๋ฅ DNA(dsDNA)์ ๋๋๋ฅผ ์ถ์ ํฉ๋๋ค. ํต์ฐ์ 260 nm์์ ์์ธ์ ์ ๊ฐํ๊ฒ ํก์ํ๋ฉฐ, ์ด ํก๊ด๋๋ ๋๋์ ์ ๋น๋กํฉ๋๋ค. ๊ทธ๋์ ๋ถ์์๋ฌผํ ์คํ์ค์์ DNA๋ฅผ ๋น ๋ฅด๊ฒ ์ ๋ํ๋ ํ์ค ๋ฐฉ๋ฒ์ผ๋ก ๋๋ฆฌ ์ฐ์ ๋๋ค.
์ฌ์ฉ ๋ฐฉ๋ฒ
๋ถ๊ด๊ด๋๊ณ ํ๋ฉด์ ํ์๋ A260 ํก๊ด๋ ๊ฐ์ ์ ๋ ฅํ์ธ์. ๊ทธ๋ค์ ํฌ์ ๋ฐฐ์๋ฅผ ์ ๋ ฅํฉ๋๋ค. ์ธก์ ์ ์ ์๋ฃ๋ฅผ 1:10์ผ๋ก ํฌ์ํ๋ค๋ฉด ๋ฐฐ์๋ 10์ด๊ณ , ํฌ์ํ์ง ์๊ณ ์์ก ๊ทธ๋๋ก ์ธก์ ํ๋ค๋ฉด 1์ ์ ๋ ฅํ๋ฉด ๋ฉ๋๋ค. ์๋ฃ์ ์ด ๋ถํผ(ยตL)๋ฅผ ํจ๊ป ์ ๋ ฅํ๋ฉด ์ ์ฒด DNA ์์จ๊น์ง ์ถ์ ํ ์ ์์ต๋๋ค. ๊ณ์ฐ ๊ฒฐ๊ณผ๋ก๋ ng/ยตL ๋๋(์์น์ ๋์ผํ ยตg/mL ํฌํจ)์ ์ด ์ง๋์ด ๋์ต๋๋ค.
๊ณต์ ์ค๋ช
๊ณ์ฐ์์ ๋ค์๊ณผ ๊ฐ์ต๋๋ค.
$$\text{๋๋ (ng/ยตL)} = A_{260} \times 50 \times \text{ํฌ์ ๋ฐฐ์}$$์ฌ๊ธฐ์ 50์ dsDNA์ ๋ณํ ์์๋ก, ๊ด๊ฒฝ๋ก 1 cm์์ A260์ด ์ ํํ 1.0์ธ ์๋ฃ๊ฐ ์ฝ 50 ng/ยตL์ ์ด์ค๊ฐ๋ฅ DNA๋ฅผ ํจ์ ํ๋ค๋ ์๋ฏธ์ ๋๋ค. ๋จ์ผ๊ฐ๋ฅ DNA(ssDNA)์๋ 33, RNA์๋ 40์ ์ฌ์ฉํ์ง๋ง, ์ด ๊ณ์ฐ๊ธฐ๋ dsDNA๋ฅผ ๊ธฐ์ค์ผ๋ก ํฉ๋๋ค. ๋ง์ดํฌ๋ก๊ทธ๋จ ๋จ์์ ์ด ์์จ์ ๋ค์๊ณผ ๊ฐ์ด ๊ตฌํฉ๋๋ค.
$$\text{Yield}_{\mu g} = \frac{C \times V}{1000}$$
๊ณ์ฐ ์์
์๋ฅผ ๋ค์ด NanoDrop์์ 1:10์ผ๋ก ํฌ์ํ ์๋ฃ์ A260์ด 0.5๋ก ์ธก์ ๋์๊ณ , ์ต์ข ๋ถํผ๊ฐ 50 ยตL๋ผ๊ณ ๊ฐ์ ํด ๋ด ์๋ค. ๋๋๋ ๋ค์๊ณผ ๊ฐ์ต๋๋ค.
$$0.5 \times 50 \times 10 = 250 \text{ ng/ยตL}$$์ด ์์จ์ ๋ค์๊ณผ ๊ฐ์ด ๊ณ์ฐ๋ฉ๋๋ค.
$$\frac{250 \times 50}{1000} = 12.5 \text{ ยตg}$$์์ฃผ ๋ฌป๋ ์ง๋ฌธ
์ 50์ธ๊ฐ์? ๊ด๊ฒฝ๋ก 1 cm, 260 nm ์กฐ๊ฑด์์ dsDNA์ ๋ํด ์คํ์ ์ผ๋ก ํ๋ฆฝ๋ ํก๊ด ๊ณ์์ด๊ธฐ ๋๋ฌธ์ ๋๋ค.
ํฌ์ํ์ง ์์๋ค๋ฉด ํฌ์ ๋ฐฐ์๋ ์ผ๋ง์ธ๊ฐ์? \(1\)์ ์ ๋ ฅํ์ธ์.
ng/ยตL์ ยตg/mL๋ ๊ฐ์ ๊ฐ์ธ๊ฐ์? ๋ค, ๋ ๋จ์๋ ์์น์ ์์ ํ ๋์ผํฉ๋๋ค. ๋ฐ๋ผ์ 250 ng/ยตL๋ 250 ยตg/mL์ ๊ฐ์ต๋๋ค.