라이게이션 계산기

계산 입력

벡터 양 (ng)

벡터 길이 (bp)

인서트 길이 (bp)

인서트 : 벡터 몰 비율

결과

필요한 인서트 양

30

나노그램 (ng)

벡터 양	50 ng
인서트 : 벡터 몰 비율	3 : 1

라이게이션 계산기란?

라이게이션 계산기는 인서트와 벡터를 원하는 몰 비율로 맞춰 라이게이션 반응을 세팅할 때 필요한 인서트 DNA 양을 계산해 줍니다. DNA 단편은 길수록 분자 하나의 무게가 무거워지기 때문에, 단순히 인서트와 벡터를 같은 질량으로 섞는다고 같은 몰 수가 되지는 않습니다. 따라서 두 단편의 상대적인 길이와 원하는 몰 비율에 맞춰 인서트 질량을 보정해야 합니다. 이 도구는 실험실이나 국가에 관계없이 표준적인 분자 클로닝 전반에 두루 사용할 수 있습니다.

라이게이션은 삽입 단편을 벡터 골격에 연결해 환형 재조합 플라스미드를 만듭니다.

사용 방법

사용하려는 벡터의 양(나노그램, ng), 벡터의 길이(염기쌍, bp), 인서트의 길이(bp), 그리고 원하는 인서트:벡터 몰 비율을 입력하세요. 점착 말단(sticky-end) 라이게이션에서는 인서트:벡터 = 3:1이 흔히 쓰이는 출발점입니다. 그러면 계산기가 벡터와 함께 넣어야 할 인서트의 양을 ng 단위로 알려 줍니다.

공식 설명

필요한 인서트 양은 다음과 같이 구합니다.

$$\text{인서트 양} = \frac{\text{몰 비율} \times \text{인서트 길이} \times \text{벡터 양}}{\text{벡터 길이}}$$

여기서 (인서트 길이 / 벡터 길이) 항은 1:1 질량 비율을 1:1 몰 비율로 변환해 주는 역할을 하며, 여기에 원하는 몰 비율을 곱하면 목표 비율에 맞게 보정됩니다. 결과는 벡터 양과 동일한 질량 단위(ng)로 표시됩니다.

삽입 질량은 몰비, 삽입물과 벡터의 길이, 벡터 질량에 따라 달라집니다.

계산 예시

5000 bp 벡터를 50 ng 사용하고, 1000 bp 인서트와 3:1 몰 비율로 맞추고 싶다고 가정해 봅시다. 그러면 인서트 양 $$= \frac{3 \times 1000 \times 50}{5000} = \frac{150000}{5000} = 30 \text{ ng}$$가 됩니다. 즉, 반응액에 인서트 30 ng을 넣으면 됩니다.

자주 묻는 질문

어떤 몰 비율을 써야 하나요? 점착 말단 라이게이션에서는 인서트:벡터 = 3:1이 일반적입니다. 1:1부터 5:1까지(평활 말단의 경우 더 높게) 다양하게 쓰이므로, 클로닝이 잘 안 될 때는 여러 비율을 시도해 보세요.

결과 단위가 ng인가요? 네. 인서트 양은 벡터 양에 사용한 단위와 동일하게 표시되며, 여기서는 나노그램(ng)입니다.

길이에 벡터 백본도 포함되나요? 선형화된 각 분자의 전체 길이를 bp 단위로 입력하세요. 벡터는 백본을 포함한 전체 길이를, 인서트는 단편 전체 길이를 사용합니다.