RNA ๋๋ ๊ณ์ฐ๊ธฐ๋?
์ด ๊ณ์ฐ๊ธฐ๋ NanoDrop ๊ฐ์ UV ๋ถ๊ด๊ด๋๊ณ๋ก ์ธก์ ํ 260 nm ํก๊ด๋(A260) ๊ฐ์ ๋ฐํ์ผ๋ก RNA ์๋ฃ์ ๋๋๋ฅผ ์ถ์ ํฉ๋๋ค. ๋จ์ผ๊ฐ๋ฅ RNA์ ์ ์ฉ๋๋ ํ์ค ํก๊ด ํ์ฐ ๊ณ์๋ฅผ ์ฌ์ฉํ๋ฉฐ, A260๊ฐ 1.0์ผ ๋ ์ฝ 40 ng/ยตL์ RNA์ ํด๋นํ๋ค๋ ์๋ฆฌ๋ฅผ ๋ฐ๋ฆ ๋๋ค. ํน์ ๊ตญ๊ฐ์ ํ์ ๋์ง ์๋ ๋ฒ์ฉ ๋๊ตฌ๋ก, ์ ์ธ๊ณ ์ด๋ ์คํ์ค์์๋ ๊ทธ๋๋ก ์ฌ์ฉํ ์ ์์ต๋๋ค.
์ฌ์ฉ ๋ฐฉ๋ฒ
์ธก์ ํ A260 ๊ฐ๊ณผ ์ธก์ ์ ์ ์ ์ฉํ ํฌ์ ๋ฐฐ์๋ฅผ ์ ๋ ฅํ์ธ์(ํฌ์ ์์ด ์์ก ๊ทธ๋๋ก ์ธก์ ํ๋ค๋ฉด 1์ ์ ๋ ฅํฉ๋๋ค). ์๋ฃ ๋ถํผ(ยตL)๋ฅผ ์ถ๊ฐ๋ก ์ ๋ ฅํ๋ฉด ์ด RNA ํ์๋๊น์ง ๊ณ์ฐ๋ฉ๋๋ค. ๊ณ์ฐ๊ธฐ๋ ng/ยตL ๋จ์์ ๋๋(ยตg/mL์ ๋์ผ)์ ํ์๋ RNA ์ด๋์ ํจ๊ป ๋ณด์ฌ์ค๋๋ค.
๊ณ์ฐ ๊ณต์ ์ค๋ช
RNA ๋๋(ng/ยตL):
$$\text{Concentration} = \text{A260} \times 40 \times \text{Dilution} \;\;\text{(ng/}\mu\text{L)}$$์ฌ๊ธฐ์ ๊ณ์ 40์ 1 cm ๊ด๊ฒฝ๋ก ์ ์์ 260 nm ํ์ฅ์ ๋ํ ๋จ์ผ๊ฐ๋ฅ RNA์ ๊ฒฝํ์ ํก๊ด ๊ณ์์ ๋๋ค. ์ด ํ์๋(ยตg)์ ๋ค์๊ณผ ๊ฐ์ด ๊ตฌํฉ๋๋ค.
$$\text{Yield (}\mu\text{g)} = \frac{\left(\text{A260} \times 40 \times \text{Dilution}\right) \times \text{Volume }(\mu\text{L})}{1000}$$
๊ณ์ฐ ์์
A260 = 0.25, ํฌ์ ๋ฐฐ์ = 50, ๋ถํผ = 100 ยตL์ธ ๊ฒฝ์ฐ๋ฅผ ๊ฐ์ ํด ๋ด ์๋ค. ๋๋ \(= 0.25 \times 40 \times 50 = 500\) ng/ยตL. ์ด ํ์๋ \(= 500 \times 100 \div 1000 = 50\) ยตg์ RNA์ ๋๋ค.
์์ฃผ ๋ฌป๋ ์ง๋ฌธ
์ 50์ด ์๋๋ผ 40์ธ๊ฐ์? ๊ณ์ 50์ ์ด์ค๊ฐ๋ฅ DNA์ ์ฌ์ฉ๋ฉ๋๋ค. ๋จ์ผ๊ฐ๋ฅ RNA๋ ํก๊ด ํน์ฑ์ด ์กฐ๊ธ ๋ฌ๋ผ์ A260 ๋จ์๋น 40 ng/ยตL๊ฐ ๊ณต์ธ๋ ์์๋ก ์ฐ์ ๋๋ค.
์๋๋ ์ด๋ป๊ฒ ํ์ธํ๋์? A260๋ง์ผ๋ก๋ ๋๋๋ง ์ ์ ์์ต๋๋ค. ์์ํ RNA์ ๊ฒฝ์ฐ A260/A280 ๋น์จ์ด ์ฝ 2.0์ด๋ฉฐ, A260/A230 ๋น์จ๊ณผ ํจ๊ป ํ์ธํ๋ฉด ์ค์ผ ์ฌ๋ถ๋ฅผ ํ๋จํ ์ ์์ต๋๋ค.
๊ด๊ฒฝ๋ก ๊ธธ์ด๋ ์ํฅ์ ์ฃผ๋์? ์ด ๊ณ์๋ ํ์ค 1 cm ๊ด๊ฒฝ๋ก๋ฅผ ์ ์ ๋ก ํฉ๋๋ค. ์ต์ ๋ง์ดํฌ๋ก๋ณผ๋ฅจ ์ฅ๋น๋ ์ธก์ ๊ฐ์ ์๋์ผ๋ก 1 cm ๊ธฐ์ค์ผ๋ก ๋ณด์ ํด ์ค๋๋ค.