Что это за калькулятор концентрации РНК?
Этот калькулятор оценивает концентрацию образца РНК по его поглощению на длине волны 260 нм (A260), измеренному на УФ-спектрофотометре — например, на NanoDrop. В основе расчёта лежит стандартный коэффициент пересчёта для одноцепочечной РНК: значение A260, равное 1,0, соответствует примерно 40 нг/мкл РНК. Инструмент универсален и подходит для любой лаборатории в мире.
Как пользоваться
Введите измеренное значение A260, использованный коэффициент разведения перед измерением (укажите 1, если образец измеряли неразбавленным) и при желании — объём образца в микролитрах, чтобы рассчитать общий выход РНК. Калькулятор выдаёт концентрацию в нг/мкл (что эквивалентно мкг/мл) и общее количество выделенной РНК.
Формула расчёта
Концентрация РНК (нг/мкл) =
$$\text{Concentration} = \text{A260} \times 40 \times \text{Dilution} \;\;\text{(ng/}\mu\text{L)}$$Множитель 40 — это эмпирически выведенный коэффициент экстинкции для одноцепочечной РНК при 260 нм в кювете с длиной оптического пути 1 см. Общий выход (мкг) =
$$\text{Yield (}\mu\text{g)} = \frac{\left(\text{A260} \times 40 \times \text{Dilution}\right) \times \text{Volume }(\mu\text{L})}{1000}$$
Пример расчёта
Допустим, A260 = 0,25, коэффициент разведения = 50, а объём = 100 мкл. Концентрация = \(0{,}25 \times 40 \times 50 = 500\) нг/мкл. Общий выход = \(500 \times 100 \div 1000 = 50\) мкг РНК.
Частые вопросы
Почему 40, а не 50? Множитель 50 применяют для двухцепочечной ДНК; одноцепочечная РНК поглощает свет немного иначе, поэтому общепринятой константой считается 40 нг/мкл на единицу A260.
А как насчёт чистоты? Только A260 даёт лишь концентрацию; для оценки загрязнений проверьте соотношение A260/A280 (около 2,0 для чистой РНК) и A260/A230.
Важна ли длина оптического пути? Коэффициент рассчитан на стандартную длину пути 1 см. Современные микрообъёмные приборы автоматически приводят результаты к 1 см.
