ما هي حاسبة تركيز الـ RNA؟
تقدّر هذه الحاسبة تركيز عيّنة الحمض النووي الريبوزي (RNA) انطلاقًا من امتصاصيتها عند الطول الموجي 260 نانومتر (A260) المقيسة بجهاز مطياف ضوئي يعمل بالأشعة فوق البنفسجية مثل جهاز NanoDrop. وتعتمد على معامل التحويل القياسي المبني على معامل الانطفاء للحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة، حيث تقابل قيمة A260 تساوي 1.0 ما يعادل تقريبًا 40 نانوغرام/ميكرولتر من الـ RNA. الأداة عامّة وتصلح لأي مختبر في أي مكان حول العالم.
كيفية استخدامها
أدخل قيمة A260 المقيسة، ثم عامل التخفيف المستخدم قبل القراءة (استخدم 1 إذا قُرئت العيّنة دون تخفيف)، ويمكنك اختياريًا إدخال حجم العيّنة بالميكرولتر لحساب الكمية الكلية من الـ RNA. تعرض الحاسبة التركيز بوحدة نانوغرام/ميكرولتر (المكافئة لـ ميكروغرام/مل) بالإضافة إلى الكمية الإجمالية للـ RNA المُستخلَص.
شرح المعادلة
$$\text{Concentration} = \text{A260} \times 40 \times \text{Dilution} \;\;\text{(ng/}\mu\text{L)}$$ والعدد 40 هو معامل الانطفاء المُستنبط تجريبيًا للحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة عند 260 نانومتر في خلية ذات مسار ضوئي طوله 1 سم. أما الكمية الكلية $$\text{Yield (}\mu\text{g)} = \frac{\left(\text{A260} \times 40 \times \text{Dilution}\right) \times \text{Volume }(\mu\text{L})}{1000}$$
مثال تطبيقي
لنفترض أن \(\text{A260} = 0.25\)، وعامل التخفيف = 50، والحجم = 100 ميكرولتر. عندها يكون التركيز $$0.25 \times 40 \times 50 = 500 \;\text{نانوغرام/ميكرولتر}$$ والكمية الكلية $$\frac{500 \times 100}{1000} = 50 \;\text{ميكروغرام من الـ RNA}$$
الأسئلة الشائعة
لماذا 40 وليس 50؟ يُستخدم المعامل 50 للحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) مزدوج السلسلة؛ أما الـ RNA أحادي السلسلة فيمتص الضوء بصورة مختلفة قليلًا، لذا يُعدّ 40 نانوغرام/ميكرولتر لكل وحدة A260 هو الثابت المعتمد.
ماذا عن النقاء؟ تعطي قيمة A260 وحدها التركيز فقط؛ ولتقييم النقاء تحقّق من نسبة A260/A280 (نحو 2.0 للـ RNA النقي) ومن نسبة A260/A230 للكشف عن التلوّث.
هل لطول المسار الضوئي أهمية؟ يفترض المعامل مسارًا ضوئيًا قياسيًا طوله 1 سم. والأجهزة الحديثة ذات الأحجام الصغيرة (microvolume) تُعدّل القراءات تلقائيًا لتكافئ مسارًا طوله 1 سم.
