ما هي حاسبة تركيز الحمض النووي؟
تقدّر هذه الحاسبة تركيز الحمض النووي مزدوج السلسلة (dsDNA) في العينة انطلاقًا من قراءة الامتصاصية عند الطول الموجي 260 نانومتر (A260) التي يقيسها جهاز مطياف ضوئي مثل NanoDrop أو جهاز الأشعة فوق البنفسجية المعتمد على الكوفيت (cuvette). تمتص الأحماض النووية الأشعة فوق البنفسجية بقوة عند 260 نانومتر، وتتناسب هذه الامتصاصية طرديًا مع التركيز، ما يجعلها الطريقة السريعة القياسية لتقدير كمية الحمض النووي في مختبرات البيولوجيا الجزيئية.
كيفية الاستخدام
أدخل قيمة الامتصاصية A260 التي يعرضها جهاز المطياف الضوئي لديك. ثم أدخل عامل التخفيف — فإذا خفّفت العينة بنسبة 1:10 قبل القياس يكون العامل 10، أما إذا قستها دون تخفيف فاستخدم 1. ويمكنك اختياريًا إدخال حجم العينة الكلي بالميكروليتر لتقدير الناتج الإجمالي من الحمض النووي أيضًا. تعرض الأداة التركيز بوحدة ng/µL (وما يعادلها عدديًا µg/mL) إضافةً إلى الكتلة الإجمالية.
شرح المعادلة
تُحسب النتيجة وفق المعادلة التركيز (ng/µL) = A260 × 50 × عامل التخفيف.
$$\text{التركيز (ng/µL)} = A_{260} \times 50 \times \text{عامل التخفيف}$$والرقم 50 هو ثابت التحويل الخاص بالحمض النووي مزدوج السلسلة: فالعينة ذات مسار ضوئي بطول 1 سم وقيمة A260 تساوي 1.0 بالضبط تحتوي على نحو 50 ng/µL من الحمض النووي مزدوج السلسلة. أما الحمض النووي أحادي السلسلة فيُستخدم له الرقم 33، والحمض النووي الريبي RNA يُستخدم له الرقم 40، لكن هذه الأداة تفترض أن العينة من نوع dsDNA. ويُحسب الناتج الإجمالي بالميكروغرام عبر: التركيز × الحجم ÷ 1000.
$$\text{الناتج}_{\mu g} = \frac{\text{التركيز} \times \text{الحجم}}{1000}$$
مثال تطبيقي
لنفترض أن جهاز NanoDrop أظهر قيمة A260 تساوي 0.5 لعينة مخففة بنسبة 1:10، بحجم نهائي قدره 50 ميكروليتر. عندئذٍ يكون التركيز =
$$0.5 \times 50 \times 10 = \textbf{250 ng/µL}$$والناتج الإجمالي =
$$\frac{250 \times 50}{1000} = 12.5 \text{ ميكروغرام}$$الأسئلة الشائعة
لماذا الرقم 50؟ لأنه معامل الانقراض (extinction factor) المثبت تجريبيًا للحمض النووي مزدوج السلسلة عند 260 نانومتر ومسار ضوئي بطول 1 سم.
ماذا يكون عامل التخفيف إذا لم أخفّف العينة؟ استخدم الرقم 1.
هل وحدة ng/µL تساوي µg/mL؟ نعم — الوحدتان متطابقتان عدديًا، فقيمة 250 ng/µL تساوي 250 µg/mL.
