DNA सांद्रता कैलकुलेटर क्या है?
यह कैलकुलेटर आपके नमूने में डबल-स्ट्रैंडेड DNA (dsDNA) की सांद्रता का अनुमान 260 nm पर मापे गए अवशोषण (A260) से लगाता है। यह माप किसी स्पेक्ट्रोफोटोमीटर — जैसे NanoDrop या क्यूवेट-आधारित UV उपकरण — पर लिया जाता है। न्यूक्लिक अम्ल 260 nm पर UV प्रकाश को बहुत प्रबलता से सोखते हैं, और यह अवशोषण सीधे सांद्रता के समानुपाती होता है। इसी वजह से यह आणविक जीवविज्ञान (molecular biology) की प्रयोगशालाओं में DNA की मात्रा जल्दी आँकने की मानक विधि है।
इसका उपयोग कैसे करें
अपने स्पेक्ट्रोफोटोमीटर पर दिखने वाला A260 अवशोषण मान दर्ज करें। फिर तनुकरण कारक (dilution factor) भरें — अगर आपने रीडिंग लेने से पहले नमूने को 1:10 तनु किया था, तो कारक 10 होगा; और अगर आपने बिना तनु किए सीधे पढ़ा है, तो 1 लिखें। चाहें तो माइक्रोलीटर में कुल नमूना आयतन भी दर्ज करें, ताकि कुल DNA उपज (yield) का अनुमान भी मिल सके। यह उपकरण आपको सांद्रता ng/µL में (और संख्यात्मक रूप से समान µg/mL में) तथा कुल द्रव्यमान बताता है।
सूत्र की व्याख्या
गणना इस प्रकार होती है: $$\text{सांद्रता (ng/µL)} = A_{260} \times 50 \times \text{तनुकरण कारक}$$। यहाँ 50 dsDNA के लिए रूपांतरण स्थिरांक है: 1 cm पाथ-लेंथ वाले नमूने का A260 ठीक 1.0 होने पर उसमें लगभग 50 ng/µL डबल-स्ट्रैंडेड DNA मौजूद होता है। सिंगल-स्ट्रैंडेड DNA के लिए यह मान 33 और RNA के लिए 40 होता है, परंतु यह उपकरण dsDNA मानकर चलता है। माइक्रोग्राम में कुल उपज $$\text{उपज}_{\mu g} = \frac{C \times V}{1000}$$
हल किया हुआ उदाहरण
मान लीजिए आपका NanoDrop किसी 1:10 तनु किए गए नमूने पर \(A_{260} = 0.5\) दिखाता है, और अंतिम आयतन 50 µL है। तब सांद्रता $$= 0.5 \times 50 \times 10 = 250 \text{ ng/µL}$$ कुल उपज $$= \frac{250 \times 50}{1000} = 12.5 \text{ µg}$$
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
50 ही क्यों? यह 260 nm और 1 cm पाथ-लेंथ पर dsDNA के लिए प्रयोगों से स्थापित विलोपन कारक (extinction factor) है।
अगर मैंने नमूने को तनु ही नहीं किया तो तनुकरण कारक क्या होगा? 1 का उपयोग करें।
क्या ng/µL और µg/mL एक ही हैं? हाँ — दोनों संख्यात्मक रूप से बराबर हैं, यानी 250 ng/µL का अर्थ 250 µg/mL ही है।
