Công cụ tính nồng độ DNA là gì?
Công cụ này ước tính nồng độ DNA mạch kép (dsDNA) trong mẫu dựa trên giá trị độ hấp thụ tại bước sóng 260 nm (A260), đo bằng máy quang phổ như NanoDrop hoặc thiết bị UV dùng cuvette. Axit nucleic hấp thụ tia UV rất mạnh ở 260 nm, và độ hấp thụ này tỉ lệ thuận trực tiếp với nồng độ — đây chính là lý do phương pháp này trở thành cách định lượng DNA nhanh và phổ biến nhất trong các phòng thí nghiệm sinh học phân tử.
Cách sử dụng
Nhập giá trị độ hấp thụ A260 mà máy quang phổ hiển thị. Tiếp theo, nhập hệ số pha loãng — nếu bạn đã pha loãng mẫu theo tỉ lệ 1:10 trước khi đo thì hệ số là 10; còn nếu đo trực tiếp mẫu gốc thì nhập 1. Bạn cũng có thể nhập thêm tổng thể tích mẫu (microlit) để ước tính luôn tổng lượng DNA thu được. Công cụ sẽ trả về nồng độ tính bằng ng/µL (tương đương về mặt số học với µg/mL) cùng tổng khối lượng DNA.
Giải thích công thức
Công thức tính là $$\text{Nồng độ (ng/µL)} = A_{260} \times 50 \times \text{Hệ số pha loãng}$$. Con số 50 là hằng số chuyển đổi dành cho dsDNA: với chiều dài quang trình 1 cm, một mẫu có A260 đúng bằng 1,0 chứa khoảng 50 ng/µL DNA mạch kép. Với DNA mạch đơn, hằng số là 33, còn với RNA là 40 — nhưng công cụ này mặc định tính cho dsDNA. Tổng lượng DNA (tính bằng microgam) $$Yield_{\mu g} = \frac{C \times V}{1000}$$
Ví dụ minh họa
Giả sử máy NanoDrop của bạn đo được A260 là 0,5 trên mẫu đã pha loãng 1:10, với thể tích cuối cùng là 50 µL. Khi đó: $$\text{Nồng độ} = 0{,}5 \times 50 \times 10 = 250 \text{ ng/µL}$$ Tổng lượng DNA $$= \frac{250 \times 50}{1000} = 12{,}5 \text{ µg}$$
Câu hỏi thường gặp
Tại sao lại là 50? Đây là hệ số tắt (extinction factor) đã được xác định bằng thực nghiệm cho dsDNA tại bước sóng 260 nm với quang trình 1 cm.
Nếu tôi không pha loãng mẫu thì hệ số pha loãng là bao nhiêu? Hãy nhập 1.
ng/µL có giống với µg/mL không? Có — hai đơn vị này bằng nhau về mặt số học, nên 250 ng/µL chính là 250 µg/mL.
