A260/A280 비율이란?
A260/A280 비율은 분광광도계로 핵산 순도를 빠르게 가늠하는 지표입니다. 핵산은 260 nm 파장의 자외선을 강하게 흡수하는 반면, 단백질은 트립토판·티로신 같은 방향족 아미노산 때문에 280 nm에서 흡광을 보입니다. 260 nm 흡광도를 280 nm 흡광도로 나누면, DNA나 RNA 시료에 단백질이나 기타 오염물질이 얼마나 섞여 있는지를 나타내는 비율을 얻을 수 있습니다.
계산기 사용 방법
NanoDrop 같은 UV 분광광도계로 시료를 측정한 뒤 260 nm와 280 nm에서의 흡광도 값을 확인하세요. 두 값을 위 입력란에 넣으면 비율이 즉시 계산됩니다. 정확한 측정을 위해 블랭크 보정을 거치고 적절히 희석한 시료를 사용하는 것이 좋습니다.
계산 공식
계산은 아주 간단합니다.
$$\text{Ratio} = \dfrac{A_{260}}{A_{280}}$$같은 시료에서 측정한 두 흡광도의 비율이기 때문에 광경로 길이와 농도가 대부분 상쇄되며, 시료 농도와 무관하게 안정적인 품질 지표로 활용할 수 있습니다.
결과 해석하기
일반적으로 DNA는 약 1.8, RNA는 약 2.0일 때 "순수"한 것으로 봅니다. 비율이 눈에 띄게 낮으면(예: 1.7 미만) 280 nm 부근에서 흡광하는 단백질, 페놀, 기타 오염물질이 존재할 가능성이 있습니다. 반대로 예상보다 높은 비율은 DNA 시료에 RNA가 혼입되었을 때 나타날 수 있습니다.
계산 예시
예를 들어 NanoDrop에서 \(A_{260} = 1.8\), \(A_{280} = 1.0\)으로 측정되었다고 합시다. 비율은
$$\text{Ratio} = \dfrac{1.8}{1.0} = 1.8$$이며, 이는 단백질 오염이 거의 없는 깨끗한 게놈 DNA임을 의미합니다.
A260/A280 순도 참고값
A260/A280 비율은 260 nm에서의 흡광도(핵산의 흡수 최대값)와 280 nm에서의 흡광도(단백질의 방향족 아미노산의 흡수 최대값)를 비교합니다. 정제된 DNA와 RNA는 특성적인 비율을 가지므로, 이 값은 샘플이 얼마나 깨끗한지 빠르게 분광광도계로 확인할 수 있는 방법입니다. 상보적인 A260/A230 비율은 다른 종류의 오염물질(유기 화합물과 카오트로픽 염)을 검출하므로, 두 개는 보통 함께 보고됩니다.
| 샘플 / 조건 | 예상 A260/A280 | 예상 A260/A230 | 해석 |
|---|---|---|---|
| 순수 이중 나선 DNA (dsDNA) | ~1.8 | ~2.0–2.2 | 깨끗한 게놈/플라스미드 DNA의 허용 목표값 |
| 순수 RNA | ~2.0 | ~2.0–2.2 | 깨끗한 전체/메신저 RNA의 허용 목표값 |
| 순수 단일 나선 DNA (ssDNA) / 올리고뉴클레오티드 | ~1.9 | ~2.0–2.2 | 염기 조성에 따라 dsDNA와 RNA 사이에서 변함 |
| A260/A280이 ~1.7 미만 | < 1.7 | — | 단백질, 페놀 또는 기타 280 nm 흡수물질이 존재할 가능성 |
| A260/A280이 ~2.0 초과 (DNA의 경우) | > 2.0 | — | RNA 혼입, 분해된 뉴클레오티드 또는 알칼리성 pH 가능성 |
| 낮은 A260/A230 (예: < 1.8) | — | < 1.8 | 구아니딘 염, 페놀, EDTA 또는 탄수화물 오염 |
일반적인 오염물질과 그 영향
- 단백질 — 280 nm에서 강하게 흡수(트립토판, 티로신, 페닐알라닌)하여 A260/A280 비율을 1.8 미만으로 낮춥니다.
- 페놀 — 페놀-클로로포름 추출의 잔류물; 270–280 nm 근처와 230 nm에서도 흡수하여 두 비율 모두를 낮추고 겉보기 수율을 높입니다.
- 구아니딘 / 카오트로픽 염 및 EDTA — 약 230 nm 주변에서 흡수하여 주로 A260/A230 비율을 낮추면서 A260/A280는 정상에 가깝게 유지됩니다.
- DNA 준비에서 RNA — 이 비율에서 RNA가 DNA보다 높게 나타나므로 A260/A280 비율을 상향(2.0 방향)으로 올립니다.
작업 예시: 분광광도계가 A260 = 0.452, A280 = 0.251을 나타냅니다. 순도 비율은 1.80으로, 깨끗한 이중 나선 DNA를 나타냅니다. 비율은 pH ~7.5–8.5에서 적절한 버퍼 공백으로 측정할 때만 의미가 있으며, 산성 조건에서는 값을 최대 ~0.2–0.3까지 인위적으로 낮출 수 있습니다.
자주 묻는 질문
어떤 값이 순수한 DNA를 의미하나요? 약 1.8 정도면 순수한 이중가닥 DNA로 봅니다.
RNA는 어떤가요? 순수한 RNA는 보통 약 2.0의 비율을 보입니다.
A260/A230도 확인해야 하나요? 네, 권장합니다. A260/A230 비율(이상적으로 2.0~2.2)은 A260/A280만으로는 놓칠 수 있는 구아니딘이나 페놀 같은 유기 오염물질을 잡아내는 데 도움이 됩니다.
