¿Qué es la relación A260/A280?
La relación A260/A280 es una medida espectrofotométrica rápida de la pureza de los ácidos nucleicos. Los ácidos nucleicos absorben con fuerza la luz ultravioleta a 260 nm, mientras que las proteínas (gracias a aminoácidos aromáticos como el triptófano y la tirosina) absorben a 280 nm. Al dividir la absorbancia a 260 nm entre la absorbancia a 280 nm se obtiene una relación que indica cuánta proteína u otros contaminantes hay en una preparación de ADN o ARN.
Cómo usar esta calculadora
Mide tu muestra en un espectrofotómetro UV (como un NanoDrop) y anota los valores de absorbancia a 260 nm y a 280 nm. Introduce ambos números arriba y la calculadora te devuelve la relación al instante. Para obtener lecturas fiables, usa una muestra bien diluida y con el blanco correctamente ajustado.
La fórmula explicada
El cálculo es simplemente $$\text{Relación} = \dfrac{A_{260}}{A_{280}}$$ Como se trata del cociente entre dos absorbancias medidas en la misma muestra, la longitud del paso óptico y la concentración prácticamente se cancelan, lo que convierte este valor en un indicador de calidad robusto e independiente de lo concentrada que esté la muestra.
Cómo interpretar el resultado
Una relación de ~1,8 se considera, en general, indicativa de ADN "puro", mientras que ~2,0 lo es para el ARN. Un valor notablemente más bajo (por ejemplo, inferior a 1,7) puede señalar la presencia de proteínas, fenol u otros contaminantes que absorben cerca de los 280 nm. Por su parte, relaciones más altas de lo esperado pueden deberse a contaminación con ARN en una muestra de ADN.
Ejemplo práctico
Supongamos que un NanoDrop indica A260 = 1,8 y A280 = 1,0. La relación es $$\text{Relación} = \frac{1{,}8}{1{,}0} = 1{,}8,$$ lo que apunta a un ADN genómico limpio y con poca contaminación proteica.
Valores de referencia de pureza A260/A280
La relación A260/A280 compara la absorbancia a 260 nm (el máximo de absorción de los ácidos nucleicos) con la absorbancia a 280 nm (el máximo de absorción de los aminoácidos aromáticos en proteínas). Dado que el ADN y el ARN purificados tienen relaciones características, el valor es una verificación espectrofotométrica rápida de lo limpia que está una muestra. La relación complementaria A260/A230 detecta una clase diferente de contaminantes (compuestos orgánicos y sales caotrópicas), por lo que las dos se suelen informar juntas.
| Muestra / condición | A260/A280 esperado | A260/A230 esperado | Interpretación |
|---|---|---|---|
| ADN de doble cadena puro (ADNdc) | ~1,8 | ~2,0–2,2 | Objetivo aceptado para ADN genómico/plásmido limpio |
| ARN puro | ~2,0 | ~2,0–2,2 | Objetivo aceptado para ARN total/mensajero limpio |
| ADN de cadena simple puro (ADNsc) / oligonucleótidos | ~1,9 | ~2,0–2,2 | Se sitúa entre ADNdc y ARN dependiendo de la composición de bases |
| A260/A280 por debajo de ~1,7 | < 1,7 | — | Es probable que haya proteína, fenol u otros absorbentes a 280 nm presentes |
| A260/A280 por encima de ~2,0 (para ADN) | > 2,0 | — | Posible arrastre de ARN, nucleótidos degradados o pH alcalino |
| A260/A230 bajo (p. ej. < 1,8) | — | < 1,8 | Contaminación por sales de guanidina, fenol, EDTA o carbohidratos |
Contaminantes comunes y su efecto
- Proteína — absorbe fuertemente a 280 nm (triptófano, tirosina, fenilalanina), reduciendo la relación A260/A280 por debajo de 1,8.
- Fenol — un residuo de la extracción con fenol-cloroformo; absorbe cerca de 270–280 nm y también a 230 nm, deprimiendo ambas relaciones e inflando el rendimiento aparente.
- Sales guanidina / caotrópicas y EDTA — absorben alrededor de 230 nm, reduciendo principalmente la relación A260/A230 mientras dejan A260/A280 más cerca de lo normal.
- ARN en una preparación de ADN — empuja la relación A260/A280 hacia arriba (hacia 2,0) porque el ARN da una lectura más alta que el ADN en esta relación.
Ejemplo resuelto: un espectrofotómetro reporta A260 = 0,452 y A280 = 0,251. La relación de pureza es 1,80, lo que indica ADN de doble cadena limpio. Tenga en cuenta que la relación solo es significativa cuando se toman lecturas a pH ~7,5–8,5 con un blanco de tampón apropiado, ya que las condiciones ácidas pueden reducir artificialmente el valor hasta ~0,2–0,3.
Preguntas frecuentes
¿Qué relación indica que el ADN es puro? Un valor en torno a 1,8 señala ADN bicatenario puro.
¿Y en el caso del ARN? El ARN puro suele mostrar una relación cercana a 2,0.
¿Conviene comprobar también la relación A260/A230? Sí: la relación A260/A230 (idealmente entre 2,0 y 2,2) ayuda a detectar contaminantes orgánicos como la guanidina o el fenol, que la relación A260/A280 podría pasar por alto.
