OD600 से कोशिका घनत्व कैलकुलेटर क्या है?
600 nm पर ऑप्टिकल डेंसिटी (OD600) किसी लिक्विड कल्चर में कोशिकाओं की संख्या का अनुमान लगाने का एक तेज़ और नॉन-डिस्ट्रक्टिव तरीका है। चूँकि स्पेक्ट्रोफोटोमीटर सीधे कोशिकाओं की गिनती करने के बजाय प्रकाश के प्रकीर्णन (light scattering) को मापता है, इसलिए आप एक प्रयोगात्मक रूप से निर्धारित कन्वर्ज़न फैक्टर का उपयोग करके OD600 रीडिंग को कोशिका घनत्व (प्रति mL कोशिकाएँ) में बदलते हैं। यह कैलकुलेटर आपके OD600 को उस फैक्टर से, और वैकल्पिक रूप से कल्चर वॉल्यूम से गुणा करके कुल कोशिका संख्या निकालता है।
इसका उपयोग कैसे करें
अपनी OD600 रीडिंग, अपने जीव और उपकरण के अनुसार उपयुक्त कन्वर्ज़न फैक्टर, और (वैकल्पिक रूप से) कल्चर वॉल्यूम mL में दर्ज करें। E. coli के लिए एक व्यापक रूप से प्रचलित नियम यह है कि OD600 = 1.0 लगभग 8×10⁸ cells/mL के बराबर होता है, इसलिए डिफ़ॉल्ट फैक्टर 800,000,000 है। अलग-अलग प्रजातियाँ, स्ट्रेन, ग्रोथ फेज़ और स्पेक्ट्रोफोटोमीटर अलग-अलग फैक्टर देते हैं, इसलिए सटीक काम के लिए प्लेट काउंट या सेल काउंटर से कैलिब्रेट करें।
फ़ॉर्मूला समझें
मूल संबंध है $$\text{Cells/mL} = \text{OD600} \times f$$, जहाँ f कन्वर्ज़न फैक्टर है (प्रति OD यूनिट प्रति mL कोशिकाएँ)। कुल कोशिकाएँ \(= \text{Cells/mL} \times \text{वॉल्यूम (mL)}\)। यह संबंध केवल कम OD पर (आमतौर पर ~0.8 से नीचे) लगभग रैखिक (linear) होता है; अधिक घनत्व पर सैंपल को पतला करें और रैखिक रेंज में बने रहने के लिए वापस गुणा करें।
हल किया हुआ उदाहरण
मान लीजिए आप किसी E. coli कल्चर के लिए \(f = 8\times10^{8}\) cells/mL का उपयोग करके OD600 = 0.5 पढ़ते हैं। तब कोशिका घनत्व $$= 0.5 \times 800{,}000{,}000 = 400{,}000{,}000 \text{ cells/mL} \ (4\times10^{8}).$$ 10 mL कल्चर के लिए, कुल कोशिकाएँ $$= 400{,}000{,}000 \times 10 = 4{,}000{,}000{,}000 \text{ कोशिकाएँ} \ (4\times10^{9}).$$
अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न
मेरे स्ट्रेन के लिए कन्वर्ज़न फैक्टर अलग क्यों है? कोशिका का आकार, शेप, गुच्छे बनना (clumping) और उपकरण की ऑप्टिक्स — ये सभी प्रकीर्णन को प्रभावित करते हैं, इसलिए हर लैब को अपना खुद का फैक्टर कैलिब्रेट करना चाहिए।
क्या मैं इसका उपयोग यीस्ट या स्तनधारी (mammalian) कोशिकाओं के लिए कर सकता हूँ? हाँ, लेकिन उन कोशिकाओं के लिए कैलिब्रेट किया गया फैक्टर इस्तेमाल करें — यीस्ट के फैक्टर बैक्टीरिया की तुलना में प्रति OD यूनिट बहुत अधिक होते हैं।
मेरा OD600 1 से ऊपर है — क्या परिणाम सटीक है? शायद नहीं। सैंपल को रैखिक रेंज (अक्सर OD < 0.8) में पतला करें और परिणाम को डाइल्यूशन फैक्टर से गुणा करें।
