ما هي حاسبة تحويل OD600 إلى الكثافة الخلوية؟
تُعدّ الكثافة الضوئية عند طول موجي 600 نانومتر (OD600) وسيلة سريعة وغير متلِفة لتقدير عدد الخلايا في مزرعة سائلة. وبما أن جهاز قياس الطيف الضوئي يقيس تشتّت الضوء بدلًا من عدّ الخلايا مباشرةً، فإنك تحوّل قراءة OD600 إلى كثافة خلوية (عدد الخلايا لكل مل) عبر معامل تحويل مُستنبط تجريبيًا. تضرب هذه الحاسبة قيمة OD600 في هذا المعامل، ثم في حجم المزرعة عند الرغبة، لتمنحك العدد الإجمالي للخلايا.
طريقة الاستخدام
أدخل قراءة OD600، ومعامل التحويل المناسب للكائن الحي والجهاز المستخدم، ثم (اختياريًا) حجم المزرعة بالمليلتر. ومن القواعد التقريبية الشائعة لبكتيريا E. coli أن قيمة OD600 = 1.0 تقابل نحو \(8\times10^{8}\) خلية/مل، ولذلك تكون القيمة الافتراضية للمعامل 800,000,000. وتختلف هذه القيمة باختلاف الأنواع والسلالات وأطوار النمو وأجهزة القياس، لذا يُنصح بمعايرة المعامل عبر العدّ على أطباق الاستنبات أو باستخدام عدّاد خلايا للحصول على نتائج دقيقة.
شرح المعادلة
العلاقة الأساسية هي $$\text{الخلايا/مل} = \text{OD600} \times f$$ حيث يمثّل f معامل التحويل (عدد الخلايا لكل مل لكل وحدة OD). أما العدد الإجمالي للخلايا $$\text{العدد الإجمالي للخلايا} = \text{الخلايا/مل} \times \text{الحجم (بالمليلتر)}$$ وتكون هذه العلاقة خطية تقريبًا فقط عند قيم OD المنخفضة (عادةً أقل من نحو 0.8)؛ أما عند الكثافات الأعلى فعليك تخفيف العينة ثم الضرب في معامل التخفيف للبقاء ضمن المجال الخطي.
مثال تطبيقي
افترض أنك قرأت OD600 = 0.5 لمزرعة E. coli باستخدام معامل \(f = 8\times10^{8}\) خلية/مل. عندئذٍ تكون الكثافة الخلوية $$0.5 \times 800{,}000{,}000 = 400{,}000{,}000 \text{ خلية/مل} \ (4\times10^{8})$$ وبالنسبة لمزرعة حجمها 10 مل، يكون العدد الإجمالي للخلايا $$400{,}000{,}000 \times 10 = 4{,}000{,}000{,}000 \text{ خلية} \ (4\times10^{9})$$
الأسئلة الشائعة
لماذا يختلف معامل التحويل في سلالتي؟ يتأثر تشتّت الضوء بحجم الخلية وشكلها وتكتّلها وكذلك بخصائص بصريات الجهاز، لذا ينبغي لكل مختبر أن يعاير المعامل الخاص به.
هل يمكنني استخدامها للخمائر أو الخلايا الثديية؟ نعم، لكن استعمل معاملًا مُعايرًا لتلك الخلايا تحديدًا، فمعاملات الخمائر لكل وحدة OD أعلى بكثير من معاملات البكتيريا.
قراءة OD600 لديّ تتجاوز 1، فهل النتيجة دقيقة؟ على الأرجح لا. خفّف العينة لتعود إلى المجال الخطي (غالبًا OD أقل من 0.8) ثم اضرب النتيجة في معامل التخفيف.
