OD600 – Hücre Yoğunluğu Hesaplama Aracı nedir?
600 nm'deki optik yoğunluk (OD600), sıvı bir kültürdeki hücre miktarını tahmin etmenin hızlı ve tahribatsız bir yoludur. Spektrofotometre hücreleri tek tek saymak yerine ışık saçılımını ölçtüğü için, OD600 ölçümünü deneysel olarak belirlenmiş bir dönüşüm katsayısı kullanarak hücre yoğunluğuna (mL başına hücre) çevirirsiniz. Bu hesaplayıcı, OD600 değerinizi bu katsayıyla ve isteğe bağlı olarak kültür hacmiyle çarparak toplam hücre sayısını verir.
Nasıl kullanılır?
OD600 ölçümünüzü, organizmanıza ve cihazınıza uygun dönüşüm katsayısını ve (isteğe bağlı olarak) mL cinsinden kültür hacmini girin. E. coli için sıkça başvurulan pratik bir kural, OD600 = 1,0 değerinin yaklaşık \(8\times10^{8}\) hücre/mL'ye karşılık geldiğidir; bu nedenle varsayılan katsayı 800.000.000 olarak ayarlanmıştır. Farklı türler, suşlar, üreme evreleri ve spektrofotometreler farklı katsayılar verir; bu yüzden hassas çalışmalarda plak sayımı veya hücre sayacıyla kalibrasyon yapın.
Formülün açıklaması
Temel ilişki $$\text{Cells/mL} = \text{OD600} \times f$$ şeklindedir; burada f dönüşüm katsayısıdır (OD birimi başına mL'deki hücre sayısı). Toplam hücre = hücre/mL × hacim (mL).
$$\text{Total Cells} = \text{Cells/mL} \times \text{Volume (mL)}$$ Bu ilişki yalnızca düşük OD değerlerinde (genellikle ~0,8'in altında) yaklaşık doğrusaldır; daha yüksek yoğunluklarda örneği seyreltin ve doğrusal aralıkta kalmak için sonucu seyreltme katsayısıyla geri çarpın.
Örnek hesaplama
Diyelim ki bir E. coli kültürü için \(f = 8\times10^{8}\) hücre/mL kullanarak OD600 = 0,5 ölçtünüz. O zaman hücre yoğunluğu:$$0{,}5 \times 800{.}000{.}000 = 400{.}000{.}000 \ \text{hücre/mL} \ (4\times10^{8})$$10 mL'lik bir kültür için toplam hücre:$$400{.}000{.}000 \times 10 = 4{.}000{.}000{.}000 \ \text{hücre} \ (4\times10^{9})$$olur.
Sıkça Sorulan Sorular
Dönüşüm katsayısı neden suşuma göre değişiyor? Hücre boyutu, şekli, topaklanma ve cihazın optik özellikleri saçılımı etkiler; bu nedenle her laboratuvarın kendi katsayısını kalibre etmesi gerekir.
Bunu maya veya memeli hücreleri için kullanabilir miyim? Evet, ancak bu hücreler için kalibre edilmiş bir katsayı kullanın — maya katsayıları OD birimi başına bakteriden çok daha yüksektir.
OD600 değerim 1'in üzerinde — sonuç doğru mu? Muhtemelen değil. Örneği doğrusal aralığa (genellikle OD < 0,8) seyreltin ve sonucu seyreltme katsayısıyla çarpın.
