¿Qué es la calculadora de OD600 a densidad celular?
La densidad óptica a 600 nm (OD600) es una forma rápida y no destructiva de estimar cuántas células hay en un cultivo líquido. Como el espectrofotómetro mide la dispersión de la luz en lugar de contar las células directamente, la lectura de OD600 se convierte en densidad celular (células por mL) mediante un factor de conversión determinado de forma empírica. Esta calculadora multiplica tu OD600 por ese factor y, de manera opcional, por el volumen del cultivo para darte el recuento total de células.
Cómo usarla
Introduce tu lectura de OD600, el factor de conversión adecuado para tu organismo y tu instrumento y, si lo deseas, el volumen del cultivo en mL. Una regla práctica muy citada para E. coli establece que un OD600 = 1,0 equivale aproximadamente a \(8\times10^{8}\) células/mL, por lo que el factor predeterminado es 800.000.000. Cada especie, cepa, fase de crecimiento y espectrofotómetro arroja factores distintos, así que calibra con un recuento en placa o un contador de células cuando necesites resultados precisos.
La fórmula explicada
La relación básica es
$$\text{Células/mL} = \text{OD600} \times f$$donde f es el factor de conversión (células por mL por cada unidad de OD). El total de células:
$$\text{Total de células} = \text{Células/mL} \times \text{Volumen (mL)}$$La relación solo es aproximadamente lineal a OD bajos (normalmente por debajo de ~0,8); a densidades mayores conviene diluir la muestra y multiplicar de nuevo para mantenerte dentro del rango lineal.
Ejemplo resuelto
Imagina que mides un OD600 = 0,5 en un cultivo de E. coli usando \(f = 8\times10^{8}\) células/mL. Entonces la densidad celular:
$$0{,}5 \times 800{.}000{.}000 = 400{.}000{.}000 \text{ células/mL} \;(4\times10^{8})$$Para un cultivo de 10 mL, el total de células:
$$400{.}000{.}000 \times 10 = 4{.}000{.}000{.}000 \text{ células} \;(4\times10^{9})$$Preguntas frecuentes
¿Por qué el factor de conversión cambia según mi cepa? El tamaño y la forma de las células, su tendencia a agregarse y la óptica del instrumento influyen en la dispersión de la luz, así que cada laboratorio debería calibrar su propio factor.
¿Puedo usarla con levaduras o células de mamífero? Sí, pero emplea un factor calibrado para esas células: el factor de las levaduras es mucho mayor por unidad de OD que el de las bacterias.
Mi OD600 supera 1, ¿es fiable el resultado? Probablemente no. Diluye la muestra hasta llevarla al rango lineal (a menudo OD < 0,8) y multiplica el resultado por el factor de dilución.
