PCR मास्टर मिक्स कैलकुलेटर क्या है?
PCR मास्टर मिक्स कैलकुलेटर यह बताता है कि पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (PCR) की कई ट्यूब्स का बैच तैयार करने के लिए हर रिएजेंट की कितनी मात्रा चाहिए। हर ट्यूब में अलग-अलग कंपोनेंट पिपेट करने के बजाय आप एक साझा मास्टर मिक्स बनाते हैं और उसे ट्यूब्स में बाँट देते हैं। यह टूल हर रिएजेंट को रिएक्शन की संख्या और पिपेटिंग एक्सेस के हिसाब से स्केल कर देता है, ताकि आपके पास कभी कमी न पड़े।
इसे कैसे इस्तेमाल करें
एक रिएक्शन का वॉल्यूम, रिएक्शन की संख्या और पिपेटिंग एक्सेस (आमतौर पर 5–10%) दर्ज करें। हर रिएजेंट के लिए स्टॉक कंसन्ट्रेशन और रिएक्शन में चाहिए जाने वाला फाइनल कंसन्ट्रेशन भरें। कैलकुलेटर हर रिएजेंट का वॉल्यूम, टेम्पलेट का वॉल्यूम और बचा हुआ हिस्सा भरने के लिए न्यूक्लीज़-फ्री पानी की मात्रा निकाल देता है।
फॉर्मूला समझें
हर रिएजेंट का वॉल्यूम डायल्यूशन संबंध \(C_1 V_1 = C_2 V_2\) से निकलता है। मास्टर मिक्स के लिए हम प्रभावी रिएक्शन संख्या \(n = \text{रिएक्शन} \times \left(1 + \frac{\text{एक्सेस}}{100}\right)\) से गुणा करते हैं: $$V = \frac{C_{\text{final}} \times V_{\text{reaction}} \times n}{C_{\text{stock}}}$$ हर कंपोनेंट के स्टॉक और फाइनल की इकाइयाँ एक जैसी होनी चाहिए (X के साथ X, mM के साथ mM, µM के साथ µM, U/µL के साथ U/µL)।
हल किया हुआ उदाहरण
10% एक्सेस के साथ 25 µL की 10 रिएक्शन के लिए \(n = 10 \times 1.10 = 11\)। 10X बफर को 1X तक लाने के लिए चाहिए $$\frac{1 \times 25 \times 11}{10} = 27.5\ \text{µL}$$ dNTPs को 10 mM से 0.2 mM तक लाने के लिए चाहिए $$\frac{0.2 \times 25 \times 11}{10} = 5.5\ \text{µL}$$ कुल मिक्स वॉल्यूम \(25 \times 11 = 275\ \text{µL}\) होता है, और सभी रिएजेंट तथा टेम्पलेट के बाद जो बचता है वह पानी से भर जाता है।
सामान्य प्रश्न (FAQ)
पिपेटिंग एक्सेस क्यों जोड़ें? टिप और ट्यूब की दीवारों पर थोड़ा-थोड़ा वॉल्यूम बर्बाद होता है, जो मिलकर काफी हो जाता है; 5–10% अतिरिक्त मात्रा से आखिरी ट्यूब को भी पूरा रिएक्शन मिलता है।
अगर पानी का वॉल्यूम नेगेटिव आ जाए तो? इसका मतलब आपके रिएजेंट का कुल वॉल्यूम रिएक्शन वॉल्यूम से ज़्यादा हो गया है — किसी फाइनल कंसन्ट्रेशन को घटाएँ, स्टॉक बढ़ाएँ, या रिएक्शन वॉल्यूम बढ़ाएँ।
क्या मैं किसी कंपोनेंट को खाली छोड़ सकता हूँ? उसे हटाने के लिए उसका स्टॉक 0 कर दें; उस रिएजेंट का वॉल्यूम 0 हो जाएगा और पानी उसकी भरपाई कर देगा।
