PCR मास्टर मिक्स कैलकुलेटर

गणना दर्ज करें

रिएक्शन वॉल्यूम (µL)

रिएक्शन की संख्या

पिपेटिंग एक्सेस (%)

---

पॉलीमरेज़ बफर

स्टॉक (X)

फाइनल (X)

dNTPs

स्टॉक (mM)

फाइनल (mM)

फॉरवर्ड प्राइमर

स्टॉक (µM)

फाइनल (µM)

रिवर्स प्राइमर

स्टॉक (µM)

फाइनल (µM)

DNA पॉलीमरेज़

स्टॉक (U/µL)

फाइनल (U/µL)

प्रति रिएक्शन टेम्पलेट DNA (µL)

सूत्र (फॉर्मूला)

Show calculation steps (1)

1. Nuclease-Free Water Volume

   

   Water fills the remaining volume after all components and template. N = Reactions x (1 + Excess/100); template scaled by N.

परिणाम

कुल मास्टर मिक्स वॉल्यूम

275

µL (for 11 effective reactions)

कंपोनेंट	वॉल्यूम (µL)
बफर	27.5
dNTPs	5.5
फॉरवर्ड प्राइमर	13.75
रिवर्स प्राइमर	13.75
DNA पॉलीमरेज़	1.38
टेम्पलेट DNA	11
न्यूक्लीज़-फ्री पानी	202.12

PCR मास्टर मिक्स कैलकुलेटर क्या है?

PCR मास्टर मिक्स कैलकुलेटर यह बताता है कि पॉलीमरेज़ चेन रिएक्शन (PCR) की कई ट्यूब्स का बैच तैयार करने के लिए हर रिएजेंट की कितनी मात्रा चाहिए। हर ट्यूब में अलग-अलग कंपोनेंट पिपेट करने के बजाय आप एक साझा मास्टर मिक्स बनाते हैं और उसे ट्यूब्स में बाँट देते हैं। यह टूल हर रिएजेंट को रिएक्शन की संख्या और पिपेटिंग एक्सेस के हिसाब से स्केल कर देता है, ताकि आपके पास कभी कमी न पड़े।

मास्टर मिक्स एक बार तैयार किया जाता है, फिर सभी रिएक्शन ट्यूबों में बराबर बाँटा जाता है।

इसे कैसे इस्तेमाल करें

एक रिएक्शन का वॉल्यूम, रिएक्शन की संख्या और पिपेटिंग एक्सेस (आमतौर पर 5–10%) दर्ज करें। हर रिएजेंट के लिए स्टॉक कंसन्ट्रेशन और रिएक्शन में चाहिए जाने वाला फाइनल कंसन्ट्रेशन भरें। कैलकुलेटर हर रिएजेंट का वॉल्यूम, टेम्पलेट का वॉल्यूम और बचा हुआ हिस्सा भरने के लिए न्यूक्लीज़-फ्री पानी की मात्रा निकाल देता है।

फॉर्मूला समझें

हर रिएजेंट का वॉल्यूम डायल्यूशन संबंध \(C_1 V_1 = C_2 V_2\) से निकलता है। मास्टर मिक्स के लिए हम प्रभावी रिएक्शन संख्या \(n = \text{रिएक्शन} \times \left(1 + \frac{\text{एक्सेस}}{100}\right)\) से गुणा करते हैं: $$V = \frac{C_{\text{final}} \times V_{\text{reaction}} \times n}{C_{\text{stock}}}$$ हर कंपोनेंट के स्टॉक और फाइनल की इकाइयाँ एक जैसी होनी चाहिए (X के साथ X, mM के साथ mM, µM के साथ µM, U/µL के साथ U/µL)।

हर घटक की मात्रा डाइल्यूशन फॉर्मूले से आती है; शेष भाग को अंतिम मात्रा तक पानी से भरा जाता है।

हल किया हुआ उदाहरण

10% एक्सेस के साथ 25 µL की 10 रिएक्शन के लिए \(n = 10 \times 1.10 = 11\)। 10X बफर को 1X तक लाने के लिए चाहिए $$\frac{1 \times 25 \times 11}{10} = 27.5\ \text{µL}$$ dNTPs को 10 mM से 0.2 mM तक लाने के लिए चाहिए $$\frac{0.2 \times 25 \times 11}{10} = 5.5\ \text{µL}$$ कुल मिक्स वॉल्यूम \(25 \times 11 = 275\ \text{µL}\) होता है, और सभी रिएजेंट तथा टेम्पलेट के बाद जो बचता है वह पानी से भर जाता है।

सामान्य प्रश्न (FAQ)

पिपेटिंग एक्सेस क्यों जोड़ें? टिप और ट्यूब की दीवारों पर थोड़ा-थोड़ा वॉल्यूम बर्बाद होता है, जो मिलकर काफी हो जाता है; 5–10% अतिरिक्त मात्रा से आखिरी ट्यूब को भी पूरा रिएक्शन मिलता है।

अगर पानी का वॉल्यूम नेगेटिव आ जाए तो? इसका मतलब आपके रिएजेंट का कुल वॉल्यूम रिएक्शन वॉल्यूम से ज़्यादा हो गया है — किसी फाइनल कंसन्ट्रेशन को घटाएँ, स्टॉक बढ़ाएँ, या रिएक्शन वॉल्यूम बढ़ाएँ।

क्या मैं किसी कंपोनेंट को खाली छोड़ सकता हूँ? उसे हटाने के लिए उसका स्टॉक 0 कर दें; उस रिएजेंट का वॉल्यूम 0 हो जाएगा और पानी उसकी भरपाई कर देगा।