Что такое калькулятор мастер-микса для ПЦР?
Калькулятор мастер-микса для ПЦР рассчитывает, сколько каждого реагента нужно, чтобы приготовить сразу целую серию пробирок для полимеразной цепной реакции (ПЦР). Вместо того чтобы вносить каждый компонент в каждую пробирку по отдельности, вы готовите один общий мастер-микс и затем раскапываете его. Инструмент масштабирует объём каждого реагента на число реакций плюс запас на пипетирование — так смеси гарантированно хватит до последней пробирки.
Как пользоваться
Укажите объём одной реакции, количество реакций и запас на пипетирование (обычно 5–10 %). Для каждого реагента введите исходную (стоковую) концентрацию и нужную конечную концентрацию в реакции. Калькулятор выдаст объём каждого реагента, объём матрицы (template) и количество воды без нуклеаз, которая дополняет смесь до нужного объёма.
Разбор формулы
Объём каждого реагента выводится из соотношения разбавления \(C_1 V_1 = C_2 V_2\). Для мастер-микса мы умножаем на эффективное число реакций \(n = \text{число реакций} \times \left(1 + \frac{\text{запас}}{100}\right)\):
$$V = \frac{C_{\text{конечная}} \times V_{\text{реакции}} \times n}{C_{\text{сток}}}$$Единицы измерения исходной и конечной концентраций для каждого компонента должны совпадать (X с X, мМ с мМ, мкМ с мкМ, Ед/мкл с Ед/мкл).
Пример расчёта
Для 10 реакций по 25 мкл с запасом 10 % получаем \(n = 10 \times 1{,}10 = 11\). Буфер 10X до 1X:
$$\frac{1 \times 25 \times 11}{10} = 27{,}5 \text{ мкл}$$dNTP с 10 мМ до 0,2 мМ:
$$\frac{0{,}2 \times 25 \times 11}{10} = 5{,}5 \text{ мкл}$$Общий объём смеси составляет \(25 \times 11 = 275\) мкл, а вода заполняет всё, что осталось после внесения всех реагентов и матрицы.
Частые вопросы
Зачем добавлять запас на пипетирование? Небольшие потери объёма на наконечниках и стенках пробирок суммируются; дополнительные 5–10 % гарантируют, что в последнюю пробирку попадёт полная реакция.
Что делать, если объём воды получился отрицательным? Это значит, что объёмы реагентов уже превышают объём реакции — уменьшите одну из конечных концентраций, повысьте исходную или увеличьте объём реакции.
Можно ли оставить компонент пустым? Задайте его стоковую концентрацию равной 0, чтобы исключить его; объём этого реагента станет нулевым, а недостаток компенсирует вода.
