¿Qué es una calculadora de master mix para PCR?
Una calculadora de master mix para PCR determina cuánto necesitas de cada reactivo para preparar un lote de tubos de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En lugar de pipetear cada componente en todos los tubos, preparas una única mezcla común (master mix) y la repartes en alícuotas. Esta herramienta escala todos los reactivos según el número de reacciones más un exceso de pipeteo, de modo que nunca te quedes corto.
Cómo usarla
Introduce el volumen de una sola reacción, el número de reacciones y el exceso de pipeteo (normalmente entre el 5 % y el 10 %). Para cada reactivo, indica la concentración stock y la concentración final deseada en la reacción. La calculadora te devuelve el volumen de cada reactivo, el volumen de molde (template) y el volumen de agua libre de nucleasas que equilibra la mezcla.
La fórmula explicada
El volumen de cada reactivo se obtiene a partir de la relación de dilución \(C_1 V_1 = C_2 V_2\). Para un master mix multiplicamos por el número efectivo de reacciones \(n = \text{reacciones} \times (1 + \text{exceso}/100)\):
$$V = \frac{C_{\text{final}} \times V_{\text{reacción}} \times n}{C_{\text{stock}}}$$
Las unidades deben ser coherentes entre la concentración stock y la final de cada componente (X con X, mM con mM, µM con µM, U/µL con U/µL).
Ejemplo resuelto
Para 10 reacciones de 25 µL con un 10 % de exceso, \(n = 10 \times 1{,}10 = 11\). Un tampón 10X que quieres a 1X necesita
$$\frac{1 \times 25 \times 11}{10} = 27{,}5 \text{ µL}$$
Los dNTP de 10 mM a 0,2 mM necesitan
$$\frac{0{,}2 \times 25 \times 11}{10} = 5{,}5 \text{ µL}$$
El volumen total de la mezcla es \(25 \times 11 = 275\) µL, y el agua completa lo que quede tras añadir todos los reactivos y el molde.
Preguntas frecuentes
¿Por qué añadir un exceso de pipeteo? Las pequeñas pérdidas de volumen en las puntas y en las paredes de los tubos se acumulan; un 5–10 % adicional garantiza que el último tubo reciba una reacción completa.
¿Qué pasa si el agua sale en negativo? Tus volúmenes de reactivos ya superan el volumen de la reacción: reduce alguna concentración final, sube una concentración stock o aumenta el volumen de reacción.
¿Puedo dejar un componente en blanco? Pon su concentración stock a 0 para excluirlo; ese volumen de reactivo pasa a ser 0 y el agua lo compensa.
