什么是PCR预混液计算器？
PCR预混液计算器帮你算出配制一批聚合酶链式反应（PCR）所需的每种试剂用量。与其往每个反应管里单独加各组分，不如先配好一份共用的预混液（Master Mix），再分装到各管。本工具会按反应数量再加上一定的移液余量，对每种试剂进行放大计算，确保配制时不会出现试剂不够用的情况。
使用方法
输入单管反应体积、反应数量以及移液余量（通常取5%~10%）。对于每种试剂，分别填入母液浓度和反应体系中的目标终浓度。计算器会返回每种试剂的用量、模板DNA的用量，以及用于补足体积的无核酸酶水（nuclease-free water）的量。
公式详解
每种试剂的用量都来自稀释公式 \(C_1 V_1 = C_2 V_2\)。配制预混液时，我们乘以有效反应数 \(n = \text{反应数} \times \left(1 + \frac{\text{余量}}{100}\right)\)：
$$V = \frac{C_{\text{终浓度}} \times V_{\text{反应}} \times n}{C_{\text{母液}}}$$注意：每种组分的母液浓度与终浓度必须使用相同单位（X 对 X，mM 对 mM，µM 对 µM，U/µL 对 U/µL）。
实例演算
以10个反应、每管25 µL、余量10%为例：\(n = 10 \times 1.10 = 11\)。将10X缓冲液稀释到1X需要 \(\frac{1 \times 25 \times 11}{10} = 27.5\) µL。dNTPs从10 mM稀释到0.2 mM需要 \(\frac{0.2 \times 25 \times 11}{10} = 5.5\) µL。预混液总体积为 \(25 \times 11 = 275\) µL，扣除所有试剂和模板后，剩余体积由水补足。
常见问题
为什么要加移液余量？枪头和管壁会粘附损失少量液体，累加起来不容小觑；多配5%~10%可以确保最后一管也能加到足量的反应液。
如果算出来的水量为负数怎么办？说明你的试剂用量之和已经超过了反应体积——可以适当降低某个终浓度、提高母液浓度，或者增大反应体积。
可以不加某种组分吗？把它的母液浓度设为0即可将其排除；该试剂用量会变为0，由水来补足体积。
