PCR 마스터 믹스 계산기란?
PCR 마스터 믹스 계산기는 여러 개의 중합효소 연쇄반응(PCR) 튜브를 한 번에 준비할 때 각 시약을 얼마나 넣어야 하는지 계산해 주는 도구입니다. 튜브마다 시약을 하나하나 분주하는 대신, 공통으로 쓸 마스터 믹스를 한꺼번에 만들어 나눠 담는 방식이죠. 이 계산기는 반응 수에 피펫팅 여유분을 더해 모든 시약을 자동으로 스케일링하므로 막판에 시약이 모자랄 일이 없습니다.
사용 방법
1회 반응 용량, 반응 수, 그리고 피펫팅 여유분(보통 5~10%)을 입력하세요. 시약별로는 스톡 농도와 반응 내 목표 최종 농도를 입력합니다. 그러면 계산기가 각 시약의 용량, 주형(template) 용량, 그리고 부피를 맞추는 nuclease-free water(뉴클레아제 무첨가 정제수) 양까지 한 번에 알려줍니다.
공식 풀이
각 시약 용량은 희석 관계식 \(C_1 V_1 = C_2 V_2\)에서 나옵니다. 마스터 믹스의 경우 유효 반응 수 \(n = \text{반응 수} \times \left(1 + \frac{\text{여유분}}{100}\right)\)을 곱해 줍니다:
$$V = \frac{C_{\text{최종}} \times V_{\text{반응}} \times n}{C_{\text{스톡}}}$$단, 각 성분의 스톡과 최종 농도 단위는 반드시 서로 일치해야 합니다(X는 X끼리, mM은 mM끼리, µM은 µM끼리, U/µL은 U/µL끼리).
계산 예시
25 µL 반응 10개를 여유분 10%로 준비한다면 \(n = 10 \times 1.10 = 11\)입니다. 10X 버퍼를 1X로 만들려면
$$\frac{1 \times 25 \times 11}{10} = 27.5\ \text{µL}$$가 필요하고, dNTP를 10 mM에서 0.2 mM로 맞추려면
$$\frac{0.2 \times 25 \times 11}{10} = 5.5\ \text{µL}$$가 듭니다. 전체 믹스 용량은 \(25 \times 11 = 275\ \text{µL}\)이며, 물은 모든 시약과 주형을 넣고 남은 부피를 채웁니다.
자주 묻는 질문
피펫팅 여유분은 왜 넣나요? 팁 끝이나 튜브 벽에 묻어 사라지는 미세한 손실이 쌓이기 때문입니다. 5~10%를 더 잡아두면 마지막 튜브까지 온전한 반응액이 들어갑니다.
물 용량이 음수로 나오면 어떻게 하나요? 시약 용량의 합이 이미 반응 용량을 넘었다는 뜻입니다. 최종 농도를 낮추거나, 스톡 농도를 높이거나, 반응 용량을 늘려 보세요.
특정 성분을 비워 둘 수 있나요? 해당 성분의 스톡을 0으로 설정하면 제외됩니다. 그 시약 용량은 0이 되고 물이 그만큼을 대신 채웁니다.
