バッファー希釈計算ツールとは?
実験用バッファーは、保管スペースの節約や安定性の向上を目的に、濃縮ストック(10X TBE、5X ローディング色素、50X TAE など)として供給・保存されることがよくあります。使用前には1Xの作業濃度に希釈する必要があります。この計算ツールを使えば、必要な最終容量に合わせて、濃縮ストックと希釈液(水または溶媒)をそれぞれどれだけ混ぜればよいかが正確にわかります。
使い方
調製したい最終容量の合計と、ストックの希釈倍率(10Xなら10、50Xなら50、といった具合)を入力してください。計量すべき濃縮ストックの容量と、加える希釈液の容量が表示されます。この2つの容量を足し合わせると、必ず最終容量と一致します。
計算式の解説
希釈はシンプルな関係式 \( V_{\text{ストック}} = V_{\text{最終}} \div \text{倍率} \) に従います。残りの容量が希釈液となり、\( V_{\text{水}} = V_{\text{最終}} - V_{\text{ストック}} \) で求められます。これは濃度比が希釈倍率に等しいとした、\( C_1 V_1 = C_2 V_2 \) の式をそのまま応用したものです。
$$\begin{gathered} V_{stock} = \frac{\text{Final Volume}}{\text{Fold (X)}} \\[1.5em] V_{water} = \text{Final Volume} - V_{stock} \end{gathered}$$
計算例
10Xストックから1Xバッファーを100 mL作る場合:\( V_{\text{ストック}} = 100 \div 10 = 10 \text{ mL} \) のストックと、\( V_{\text{水}} = 100 - 10 = 90 \text{ mL} \) の水が必要です。つまり、10Xストック10 mLと水90 mLを混ぜればOKです。
標準的な実験室バッファーストック濃度
ほとんどの分子生物学バッファーは、スペースを節約し保存期間を延長するために濃縮ストックとして保存され、使用直前に1X作業濃度に希釈されます。以下の表は、一般的なバッファー、そのストックが通常供給または調製される倍数、および通常の1X用途をリストしています。
| バッファー | 典型的なストック倍数 | 1X作業用途 |
|---|---|---|
| TBE (Tris-Borate-EDTA) | 10X(または5X) | DNA/RNA用アガロース・ポリアクリルアミド電気泳動用バッファー |
| TAE (Tris-Acetate-EDTA) | 50X | アガロースゲル電気泳動用バッファー;大きなDNAフラグメント・下流抽出に推奨 |
| PBS (リン酸緩衝食塩水) | 10X | 細胞洗浄、希釈、生物学的アッセイ用等張バッファー |
| TE (Tris-EDTA) | 10X(しばしば100X) | DNA/RNAの懸濁液化と保存(1X = 10 mM Tris、1 mM EDTA) |
| SDS-PAGE ローディングダイ(Laemmli) | 5X(または4X、6X) | 変性タンパク質ゲル用サンプルローディングバッファー |
| ゲルローディングバッファー(DNA) | 5X / 6X | DNAサンプルのローディング時に泳動を追跡し密度を追加するローディングダイ |
正確なストックレシピは供給業者とプロトコルによって異なります。希釈する前に、ボトルに印刷されている倍数を必ず確認してください。1X溶液を準備するには、目的の最終体積をストック倍数で割ってコンセントレートの体積を求め、その後希釈液を最終体積まで加えます。
よくある質問
単位は何でもよいですか? はい。入力した容量の単位(mL、µL、L)がそのまま結果に反映されます。ただし、単位は全体で統一してください。
1X以外の濃度に希釈できますか? このツールは1Xを目標濃度として計算します。10Xを2Xに希釈したい場合は、まず倍率を目標濃度で割り(この場合は倍率に5を入力)してください。
なぜ希釈液は最終容量より少し少なくなるのですか? 濃縮ストック自体も容量を持っているためです。したがって、希釈液の量は最終容量からストックの容量を差し引いた値になります。