बफर डाइल्यूशन कैलकुलेटर क्या है?
लैब में इस्तेमाल होने वाले बफर अक्सर कंसन्ट्रेटेड स्टॉक के रूप में (जैसे 10X TBE, 5X लोडिंग डाई, या 50X TAE) मिलते या स्टोर किए जाते हैं — इससे जगह बचती है और इनकी स्थिरता (stability) भी बेहतर रहती है। इस्तेमाल से पहले इन्हें 1X वर्किंग कंसन्ट्रेशन तक पतला करना ज़रूरी होता है। यह कैलकुलेटर आपको ठीक-ठीक बता देता है कि किसी भी फाइनल वॉल्यूम के लिए कितना कंसन्ट्रेटेड स्टॉक और कितना डाइल्यूएंट (पानी या सॉल्वेंट) मिलाना है।
इसका इस्तेमाल कैसे करें
जितना कुल फाइनल वॉल्यूम तैयार करना है उसे दर्ज करें और अपने स्टॉक का फोल्ड कंसन्ट्रेशन डालें (10X स्टॉक के लिए 10, 50X स्टॉक के लिए 50, और इसी तरह)। कैलकुलेटर बता देता है कि कितना कंसन्ट्रेटेड स्टॉक मापना है और कितना डाइल्यूएंट मिलाना है। ये दोनों मात्राएँ जोड़ने पर हमेशा आपके फाइनल वॉल्यूम के बराबर होती हैं।
फॉर्मूला समझें
यह डाइल्यूशन एक सीधे-सादे संबंध पर आधारित है:
$$V_{stock} = \frac{\text{Final Volume}}{\text{Fold (X)}}$$बाकी बची मात्रा डाइल्यूएंट होती है:
$$V_{water} = \text{Final Volume} - V_{stock}$$यह असल में \(C_1 V_1 = C_2 V_2\) का ही सीधा उपयोग है, जहाँ कंसन्ट्रेशन का अनुपात ही फोल्ड फैक्टर के बराबर होता है।
हल किया हुआ उदाहरण
10X स्टॉक से 100 mL का 1X बफर बनाने के लिए:
$$V_{stock} = \frac{100}{10} = 10 \text{ mL}$$स्टॉक, और
$$V_{water} = 100 - 10 = 90 \text{ mL}$$पानी। यानी 10 mL 10X स्टॉक को 90 mL पानी के साथ मिला दें।
मानक प्रयोगशाला बफर स्टॉक सांद्रता
अधिकांश आणविक-जीव विज्ञान बफर को केंद्रित स्टॉक के रूप में संग्रहीत किया जाता है जो स्थान बचाने और शेल्फ जीवन में सुधार करने के लिए होता है, फिर उपयोग से तुरंत पहले 1X कार्य सांद्रता तक पतला किया जाता है। नीचे दी गई तालिका सामान्य बफर, उन गुना को सूचीबद्ध करती है जिनमें उनके स्टॉक आमतौर पर आपूर्ति किए जाते हैं या तैयार किए जाते हैं, और उनका सामान्य 1X अनुप्रयोग।
| बफर | सामान्य स्टॉक गुणक | 1X कार्य उपयोग |
|---|---|---|
| TBE (ट्रिस-बोरेट-EDTA) | 10X (या 5X) | डीएनए/आरएनए के लिए एगारोज़ और पॉलीएक्रिलामाइड जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस चलाने वाला बफर |
| TAE (ट्रिस-एसिटेट-EDTA) | 50X | एगारोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस चलाने वाला बफर; बड़े डीएनए खंडों और डाउनस्ट्रीम निष्कर्षण के लिए पसंदीदा |
| PBS (फॉस्फेट-बफर्ड लवण) | 10X | कोशिका धुलाई, पतलाकरण, और जैविक परीक्षणों के लिए समसारी बफर |
| TE (ट्रिस-EDTA) | 10X (अक्सर 100X) | डीएनए/आरएनए का पुनर्निलंबन और भंडारण (1X = 10 mM ट्रिस, 1 mM EDTA) |
| SDS-PAGE लोडिंग डाई (लैमली) | 5X (या 4X, 6X) | विकृत प्रोटीन जेल के लिए नमूना लोडिंग बफर |
| जेल लोडिंग बफर (डीएनए) | 5X / 6X | माइग्रेशन को ट्रैक करने और डीएनए नमूनों को लोड करते समय घनत्व जोड़ने के लिए लोडिंग डाई |
सटीक स्टॉक व्यंजन आपूर्तिकर्ता और प्रोटोकॉल के आधार पर भिन्न होते हैं; पतला करने से पहले हमेशा बोतल पर मुद्रित गुणक की पुष्टि करें। 1X घोल तैयार करने के लिए, वांछित अंतिम मात्रा को स्टॉक गुणक से विभाजित करें ताकि सांद्र की मात्रा मिल सके, फिर अंतिम मात्रा तक पतलाने वाला जोड़ें।
अक्सर पूछे जाने वाले सवाल
क्या यूनिट से फर्क पड़ता है? नहीं — आप जो भी वॉल्यूम यूनिट डालते हैं (mL, µL, L), नतीजा उसी यूनिट में आता है, बस आपको शुरू से आखिर तक एक ही यूनिट इस्तेमाल करनी है।
क्या मैं 1X के बजाय किसी और कंसन्ट्रेशन तक पतला कर सकता हूँ? यह टूल 1X टारगेट मानकर चलता है। अगर 10X को 2X तक पतला करना है, तो पहले फोल्ड को अपने टारगेट से भाग दें (यानी फोल्ड के तौर पर 5 इस्तेमाल करें)।
डाइल्यूएंट फाइनल वॉल्यूम से थोड़ा कम क्यों होता है? क्योंकि कंसन्ट्रेटेड स्टॉक खुद भी कुछ वॉल्यूम जोड़ता है, इसलिए डाइल्यूएंट = फाइनल वॉल्यूम घटा स्टॉक वॉल्यूम होता है।
